一种高产棘白菌素B的基因工程菌株构建方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种高产棘白菌素B的基因工程菌株构建方法和应用，所述工程菌株以厚冠突曲霉菌为底盘菌，在底盘菌中高表达ecdA基因和/或htyF基因所得。本发明专利技术提供一种高产棘白菌素B的基因工程菌株，本发明专利技术利用ecdA和htyF联合高表达提升棘白菌素B发酵产量，运用分子生物学的方法将原始菌株中的ecdA原始启动子替换为组成型强启动子gpdA，获得ecdA高表达工程菌株；在此工程菌株上对htyF高表达，获得ecdA与htyF共同高表达工程菌株。本发明专利技术构建的工程菌株均强化棘白菌素B合成途径，显著提高了Aspergillus pachycristatus的棘白菌素B产量，具有潜在的工业应用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物，具体涉及一种高产棘白菌素b的基因工程菌株构建方法和应用。

技术介绍

1、棘白菌素b是由曲霉属菌株产生的天然次生代谢物，它是临床一线抗真菌药物阿尼芬净的半合成前体，由于阿尼芬净在临床治疗中的优异表现，使得它从众多的抗真菌药物中脱颖而出，然而目前它的半合成前体棘白菌素b只能通过微生物发酵产生而不能通过化学合成，而生物发酵产生相对于化工合成的周期更长，过程更为复杂，产量却较低。因此，提升棘白菌素b产量或降低生产成本显得十分重要。

2、目前应用于提高棘白菌素b发酵产量的策略包括通过优化发酵培养条件以及结合非定向诱变获得高产菌株，也有研究基于生产菌株的遗传背景进行代谢通路改造进而提升发酵产量。通过培养基优化提升发酵产量是目前应用较多的策略，因为它无需建立遗传操作体系，易于操作，并且能够在较短的时间达到提升产量的目的。同时，由于不同的菌株在发酵时对营养成分的要求不同，在获得改造的菌株后也通常需要通过培养条件优化寻找最适宜该菌株发酵生产的条件；在利用生物反应器进行生产合成的过程中，外界营养环境(碳源、氮源和氨基酸)和物理化学因素(温度、光本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种高产棘白菌素B的基因工程菌株，其特征在于，所述工程菌株以具备产生棘白菌素基因簇的菌株为底盘菌，在底盘菌中高表达ecdA基因和/或htyF基因所得。

2.根据权利要求1所述的高产棘白菌素B的基因工程菌株，其特征在于，所述ecdA基因和htyF基因的序列分别为JX421684.1(41269-63178)和JX421685.1(22453-25202)。

3.根据权利要求1所述的高产棘白菌素B的基因工程菌株，其特征在于，所述具备产生棘白菌素基因簇的菌株优选包括厚冠突曲霉。

4.一种权利要求1所述的高产棘白菌素B的基因工程菌株的构建方法，其特征在于，...

【技术特征摘要】

1.一种高产棘白菌素b的基因工程菌株，其特征在于，所述工程菌株以具备产生棘白菌素基因簇的菌株为底盘菌，在底盘菌中高表达ecda基因和/或htyf基因所得。

2.根据权利要求1所述的高产棘白菌素b的基因工程菌株，其特征在于，所述ecda基因和htyf基因的序列分别为jx421684.1(41269-63178)和jx421685.1(22453-25202)。

3.根据权利要求1所述的高产棘白菌素b的基因工程菌株，其特征在于，所述具备产生棘白菌素基因簇的菌株优选包括厚冠突曲霉。

4.一种权利要求1所述的高产棘白菌素b的基因工程菌株的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

5.根据权利要求4的构建方法，其特征在于，步骤(1)所述的引物序列包括ecda-l-f/ecda-l-r(seq id no.1-2)和ecda-r-f/ecda-r-r...

【专利技术属性】
技术研发人员：陆玲，罗攀，蒋凯丽，王欣欣，宋萍，
申请(专利权)人：南京师范大学，
类型：发明
国别省市：