【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于食品安全，具体涉及治疗致病性大肠杆菌感染的噬菌体组合物及制备方法和应用。
技术介绍
1、大肠杆菌是人类和动物胃肠道中最常见的共生菌，也是最重要的病原体，当外界环境对机体造成影响时，养殖场内因致病性大肠杆菌导致经济动物出现腹泻、脑膜炎等疾病的现象越来越多，给养殖业带来了巨大的损失。目前，针对肠致病性大肠杆菌的主要防治措施是使用抗生素，但由于抗生素的大量使用，耐药问题十分突出。对替代抗生素的需求不断增加，因此，迫切需要开发出一种替代抗生素的新型杀菌方法。
2、噬菌体疗法利用细菌性病毒或噬菌体靶向和破坏不同感染部位的细菌。生物技术的最新进展实现了对现有的噬菌体文库的快速扩展，从而产生能够靶向和破坏感兴趣的细菌的强力且特异性的噬菌体。致病性大肠杆菌能引起各种动物腹泻。此外，有些致病性大肠杆菌菌株具有抗生素抗性，增大了治疗大肠杆菌相关慢性感染的难度。能够绕过传统的抗生素抗性机制、避免传统小分子疗法的毒副作用以及能够有效对抗生物膜的噬菌体治疗方法尤其具有吸引力。
3、噬菌体是特异感染目标细菌并进行自我复制的一类病毒，烈性噬菌体具有宿主细菌特异性、自我复制、裂解能力强、对动植物没有毒性、环境友好和易于生产等优点，因此噬菌体疗法在细菌性病害的生物防治中具有巨大潜力。大多数噬菌体的宿主谱较为狭窄，只能感染一个或者几个菌株；所以单一噬菌体制剂的使用会限制防治效果，且容易导致抗性菌的产生。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供治疗致病性大肠杆菌感染的噬菌体组合
2、本专利技术提供了对致病性大肠杆菌具有裂解作用的噬菌体，所述噬菌体包括以下至少一种：ecp2301、ecp2304和ecp2307；
3、其中ecp2301的保藏编号为cctcc no:m 20241608，ecp2304的保藏编号为cctccno:m 20241609，ecp2307的保藏编号为cctcc no:m 20241610。
4、优选的，所述致病性大肠杆菌包括以下至少一种：mq220627、mq1和ys220605；
5、其中mq220627的保藏编号为cctcc no:m 20241664，mq1的保藏编号为cctcc no:m20241665，ys220605的保藏编号为cctcc no:m 20241666。
6、本专利技术提供了一组治疗致病性大肠杆菌感染的噬菌体组合物，包括以下至少两种噬菌体：ecp2301、ecp2304和ecp2307；
7、其中ecp2301的保藏编号为cctcc no:m 20241608，ecp2304的保藏编号为cctccno:m 20241609，ecp2307的保藏编号为cctcc no:m 20241610。
8、优选的，所述致病性大肠杆菌包括以下至少一种：mq220627、xmcs2207-5、mq1和ys220605；
9、其中mq220627的保藏编号为cctcc no:m 20241664，mq1的保藏编号为cctcc no:m20241665，ys220605的保藏编号为cctcc no:m 20241666。
10、本专利技术提供了上述噬菌体或上述噬菌体组合物在制备体外抑制大肠杆菌感染的药物中的应用。
11、本专利技术还提供了上述噬菌体或上述噬菌体组合物在作为食品致病性大肠杆菌清除剂中的应用。
12、优选的，所述食品包括奶制品或肉制品。
13、本专利技术提供了上述噬菌体组合物的制备方法，包括以下步骤：(1)将噬菌体ecp2301、ecp2304和ecp2307分别在大肠杆菌培养液中培养，得培养液；
14、(2)将步骤(1)所述培养液离心后，取含噬菌体的上清液进行不同梯度的稀释，将各稀释液与大肠杆菌培养液中混合孵育，然后倒制双层平板后培养，统计噬菌斑计算得到3株噬菌体的效价；
15、(3)将3株噬菌体的效价稀释调节至(1.0±0.5)×109pfu/ml，取稀释后的噬菌体液混合后，获得所述噬菌体组合物。
16、优选的，步骤(3)所述稀释后的噬菌体液混合比例为1:1:1。
17、本专利技术还提供了一种清除食品中致病性大肠杆菌的方法，包括以下步骤：将食品样品与上述噬菌体组合物或利用上述制备方法制备得到的噬菌体组合物混合，15～35℃作用2h，得清除致病性大肠杆菌的食品。
18、有益效果：本专利技术提供了对致病性大肠杆菌具有裂解作用的噬菌体，所述噬菌体包括ecp2301、ecp2304和ecp2307，所述噬菌体组合物的宿主菌分别为致病性大肠杆菌mq220627、mq1和ys220605，且对所述致病性大肠杆菌宿主菌具有重要的抑菌作用。经实施例验证，本专利技术所述的噬菌体组合物中的5种噬菌体分别对大肠杆菌mq220627、mq1和ys220605均有较强的裂解性，并且将3种噬菌体混合后，发现噬菌体之间存在协同作用，较之于单个噬菌体具有更高效的抑制作用，可将其用做牛奶和肉的致病性大肠杆菌清除剂，均具备良好的效果。
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1.对致病性大肠杆菌具有裂解作用的噬菌体(Bacteriophage)，其特征在于，所述噬菌体包括以下至少一种：ECP2301、ECP2304和ECP2307；
2.根据权利要求1所述噬菌体，其特征在于，所述致病性大肠杆菌(Escherichia coli)包括以下至少一种：MQ220627、MQ1和YS220605；
3.一组治疗致病性大肠杆菌感染的噬菌体组合物，其特征在于，包括以下至少两种噬菌体：ECP2301、ECP2304和ECP2307；
4.根据权利要求3所述噬菌体组合物，其特征在于，所述致病性大肠杆菌包括以下至少一种：MQ220627、MQ1和YS220605；
5.权利要求1或2所述噬菌体或权利要求3或4所述噬菌体组合物在制备体外抑制大肠杆菌感染的药物中的应用。
6.权利要求1或2所述噬菌体或权利要求3或4所述噬菌体组合物在作为食品致病性大肠杆菌清除剂中的应用。
7.根据权利要求6所述应用，其特征在于，所述食品包括奶制品或肉制品。
8.权利要求3或4所述噬菌体组合物的制备方法，其特
9.根据权利要求8所述制备方法，其特征在于，步骤(3)所述稀释后的噬菌体液混合比例为1:1:1。
10.一种清除食品中致病性大肠杆菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：将食品样品与权利要求3或4所述噬菌体组合物或利用权利要求8或9所述制备方法制备得到的噬菌体组合物混合，15～35℃条件下作用2h，得清除致病性大肠杆菌的食品。
...【技术特征摘要】
1.对致病性大肠杆菌具有裂解作用的噬菌体(bacteriophage)，其特征在于，所述噬菌体包括以下至少一种：ecp2301、ecp2304和ecp2307；
2.根据权利要求1所述噬菌体，其特征在于，所述致病性大肠杆菌(escherichia coli)包括以下至少一种：mq220627、mq1和ys220605；
3.一组治疗致病性大肠杆菌感染的噬菌体组合物，其特征在于，包括以下至少两种噬菌体：ecp2301、ecp2304和ecp2307；
4.根据权利要求3所述噬菌体组合物，其特征在于，所述致病性大肠杆菌包括以下至少一种：mq220627、mq1和ys220605；
5.权利要求1或2所述噬菌体或权利要求3或4所述噬菌体组合物在制备体外抑制大肠杆菌感染的药物中的应用...
【专利技术属性】
技术研发人员：韩生义，李生庆，李淑萍，胡国元，高瑞，
申请(专利权)人：青海大学，
类型：发明
国别省市：
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