一种基于聚集诱导发光组装体和CRISPR/Cas12a的副溶血性弧菌检测方法技术

本发明专利技术涉及一种基于聚集诱导发光组装体和CRISPR/Cas12a的副溶血性弧菌检测方法。包括Cas12a蛋白、crRNA、单链荧光探针、聚集诱导发光材料/两性聚合物储备液、缓冲溶液和无酶水。所述Cas12a蛋白识别的靶标为副溶血性弧菌的特异性基因片段不耐热溶血素tlh，聚集诱导发光材料为4,7‑双[4‑(1,2,2‑三苯基乙烯基)苯基]苯并‑2,1,3,‑噻二唑，两亲性聚合物为聚苯乙烯‑马来酸酐共聚物。本发明专利技术还提供了利用该试剂盒检测副溶血性弧菌的方法。本发明专利技术提供的检测试剂盒和检测方法实现了对于副溶血性弧菌的快速检测，操作简单便携，不依赖大型仪器设备，且灵敏度高、特异性强，具有一定的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于病原微生物检测，涉及一种基于聚集诱导发光组装体和crispr/cas12a的副溶血性弧菌检测方法。

技术介绍

1、食源性致病菌普遍存在于多样化的环境和食品之中，可引发如骨髓炎、心内膜炎、菌血症等多种感染性疾病，严重影响着食品安全以及人类健康。副溶血性弧菌(vibrioparahaemolyticus)作为一种嗜盐性的革兰氏阴性菌，广泛存在于各种海洋以及河口环境中，食用受其污染的海产品可能引起严重的胃肠道疾病，甚至危及生命。因此，开发一种快速且灵敏的检测技术，用于检测食品中的副溶血性弧菌，对于确保食品安全和保障人们健康至关重要。

2、常见的传统的副溶血性弧菌的检测方法有平板菌落技术法、聚合酶链式反应(pcr)、酶联免疫吸附试验(elisa)、荧光检测等。但是传统的菌落计数法所需检测时间长，通常需两天时间才能获得检测结果；pcr和荧光检测等需要昂贵的仪器设备以及专业的操作人员，限制了其在实际中的广泛应用，因此，开发快速灵敏的副溶血性弧菌的检测方法具有重要意义。

3、簇状规则间隔短回文重复序列(crispr)系统作为一种新型本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于检测副溶血性弧菌的试剂盒，其特征在于，包括Cas12a蛋白、crRNA、单链荧光探针、聚集诱导发光材料/两性聚合物储备液、缓冲溶液和无酶水。

2.如权利要求1所述的用于检测副溶血性弧菌的试剂盒，其特征在于，所述Cas12a蛋白识别的靶标为副溶血性弧菌的特异性基因片段不耐热溶血素tlh；

3.如权利要求1所述的用于检测副溶血性弧菌的试剂盒，其特征在于，所述crRNA的核苷酸序列为：5’-UAAUUUCUACUAAGUGUAGAUAUCUGGCUGCAUUGCUGCGU-3’。

4.如权利要求1所述的用于检测副溶血性弧菌的试剂盒，其特征在于，所...

【技术特征摘要】

1.一种用于检测副溶血性弧菌的试剂盒，其特征在于，包括cas12a蛋白、crrna、单链荧光探针、聚集诱导发光材料/两性聚合物储备液、缓冲溶液和无酶水。

2.如权利要求1所述的用于检测副溶血性弧菌的试剂盒，其特征在于，所述cas12a蛋白识别的靶标为副溶血性弧菌的特异性基因片段不耐热溶血素tlh；

3.如权利要求1所述的用于检测副溶血性弧菌的试剂盒，其特征在于，所述crrna的核苷酸序列为：5’-uaauuucuacuaaguguagauaucuggcugcauugcugcgu-3’。

4.如权利要求1所述的用于检测副溶血性弧菌的试剂盒，其特征在于，所述单链荧光探针为cy3.5-ssdna荧光探针，是在ssdna的3’端修饰cy3.5荧光基团，核苷酸序列如下：5’-gacgtaaacggccacaagttc-cy3.5-3’。

5.如权利要求1所述的用于检测副溶血性弧菌的试剂盒，其特征在于，所述聚集诱导发光材料为4,7-双[4-(1,2,2-三苯基乙烯基)苯基]苯...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨传旭，吕燕君，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：