稳定表达IL-10和胰岛素的遗传修饰的细菌制造技术

本公开提供了微生物，如乳酸菌(例如，乳酸乳球菌(Lactococcus lactis))，其包含编码IL‑10多肽的外源性核酸和编码T1D特异性抗原(例如，胰岛素原)多肽的外源性核酸，其中两种外源性核酸被整合到细菌染色体中。这类微生物菌株适合用于人类治疗。本公开还提供了组合物(例如，药物组合物)使用微生物和组合物的方法，例如，用于治疗1型糖尿病(T1D)的方法，包括具有残留的β细胞功能的那些T1D，例如，最近发生的T1D。可以口服给予微生物，将微生物递送至胃肠道，其在其中释放并表达生物活性的多肽，本公开的方法特别适用于具有残留的β细胞功能的对象，例如，对于患有最近发生的T1D的对象。

【技术实现步骤摘要】

技术介绍

1、已经使用遗传修饰的微生物(例如，细菌)将治疗分子递送至粘膜组织。参见例如steidler,l.,等，nat.biotechnol.2003,21(7):785-789；和robert s.和steidler l.，microb.cell fact.2014,13增补1:s11。

2、之前已经描述了产生白介素10(il-10)的乳酸菌，并且已经描述了粘膜给予的il-10和/或胰岛素或胰岛素原用于治疗1型糖尿病(t1d)。参见例如，国际专利申请公开号wo2007/063075；robert s.等,diabetes 2014,63:2876-2887；steidler等,nat.biotechnol.2003,21(7):785-789；和takiishi t.等,j.clin.invest.2012,122(5):1717-1725。

3、然而，本领域仍然需要这样的经遗传修饰的细菌菌株，其稳定、组成型表达超过一种生物活性的多肽并且适合用于临床应用，例如，用于治疗t1d。本专利技术解决了这些需要。p>

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【技术保护点】

1.一种乳酸菌(LAB)，其包含编码人白介素-10(hIL-10)的外源性核酸和编码人胰岛素原(hPINS)的外源性核酸，其中所述编码hIL-10的外源性核酸和编码hPINS的外源性核酸经染色体整合。

2.如权利要求1所述的LAB，其中，所述LAB是乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)。

3.如权利要求1所述的LAB，其中，所述hIL-10当以不存在信号肽的成熟hIL-10分泌时，其在2位包含丙氨酸(Ala)而非脯氨酸(Pro)。

4.如权利要求1所述的LAB，其中，所述hIL-10具有与SEQ ID NO:1至少95％相同性的氨基酸序列...

【技术特征摘要】

1.一种乳酸菌(lab)，其包含编码人白介素-10(hil-10)的外源性核酸和编码人胰岛素原(hpins)的外源性核酸，其中所述编码hil-10的外源性核酸和编码hpins的外源性核酸经染色体整合。

2.如权利要求1所述的lab，其中，所述lab是乳酸乳球菌(lactococcus lactis)。

3.如权利要求1所述的lab，其中，所述hil-10当以不存在信号肽的成熟hil-10分泌时，其在2位包含丙氨酸(ala)而非脯氨酸(pro)。

4.如权利要求1所述的lab，其中，所述hil-10具有与seq id no:1至少95％相同性的氨基酸序列，或者其中所述编码il-10的外源性核酸具有与seq id no:2至少95％相同性的核苷酸序列。

5.如权利要求4所述的lab，其中，所述编码hil-10的外源性核酸还编码与hil-10偶联的分泌序列，其中所述分泌序列是未鉴定的分泌的45-kda蛋白质(usp45)(ssusp45)。

6.如...

【专利技术属性】
技术研发人员：P·罗蒂尔斯，L·斯蒂德勒，
申请(专利权)人：英特瑞克斯顿阿克图比奥帝克斯有限公司，
类型：发明
国别省市：