一种枯草芽孢杆菌发酵生产直链麦芽四糖生成酶的方法技术

本发明专利技术涉及一种枯草芽孢杆菌发酵生产直链麦芽四糖生成酶的方法，属于发酵工程技术领域，步骤包括活化重组枯草芽孢杆菌，得到种子培养液；将种子培养液接种至二级种培养基，得到二级种培养液；将二级种培养液接种至发酵培养基进行发酵培养，发酵培养的第20‑36小时开始进行氮源补料，第24‑36小时开始进行碳源补料，并在第55‑65小时引入碳源饥饿阶段，该阶段停止碳源的补料。本发明专利技术使用的重组枯草芽孢杆菌以pP43nmk为载体，选用信号肽SP<subgt;Bgls</subgt;，异源表达截去淀粉结合模块的重组直链麦芽四糖生成酶。在该发酵体系中，重组枯草芽孢杆菌在15L发酵罐中产酶活力最高达到1393.51U/mL，是摇瓶发酵酶活的450％。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及发酵工程，尤其是指一种枯草芽孢杆菌发酵生产直链麦芽四糖生成酶的方法。

技术介绍

1、直链麦芽四糖是最具潜力的麦芽低聚糖之一，是一种新型功能性糖源。其不仅具有良好的食品加工特性和独特的生理功效，还在多种生物过程中发挥着特殊的作用，因此在食品、医药、化工等领域有着广泛的应用前景。研究表明它可能有助于维护肠道健康，改善微生物平衡，甚至具有抗氧化性，保护人体免受氧化应激的损害。进一步的研究还发现，直链麦芽四糖可能对免疫系统的调节有所助益，有望在预防和治疗免疫相关疾病方面发挥作用。然而由于直链麦芽四糖的生产效率低，价格昂贵，导致其功能价值、工业潜力未得到充分挖掘，严重制约了其工业化生产和应用。

2、直链麦芽四糖的生产主要采用酶法工艺，直链麦芽四糖生成酶(ec 3.2.1.60)是其生产的关键酶制剂，长期被国外垄断。直链麦芽四糖生成酶作为gh13家族的一员，具有显著的外切酶特性，能够从淀粉的非还原末端开始特异性地作用于第4个α-1,4糖苷键，从而高效地生成以直链麦芽四糖为主的麦芽低聚糖。该酶的性能是决定麦芽四糖工业价值的核心要素之一，直接影响本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种枯草芽孢杆菌发酵生产直链麦芽四糖生成酶的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤S1中，所述重组枯草芽孢杆菌的表达宿主为枯草芽孢杆菌WB600。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤S1中，所述重组直链麦芽四糖生成酶的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤S2中，所述种子培养液的接种量为3-5％(v/v)。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤S2中，所述二级种培养基由氮源和碳源组成。

6.根据权利要求5所述的方...

【技术特征摘要】

1.一种枯草芽孢杆菌发酵生产直链麦芽四糖生成酶的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤s1中，所述重组枯草芽孢杆菌的表达宿主为枯草芽孢杆菌wb600。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤s1中，所述重组直链麦芽四糖生成酶的核苷酸序列如seq id no.1所示。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤s2中，所述种子培养液的接种量为3-5％(v/v)。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤s2中，所述二级种培养基由氮源和碳源组成。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述碳源为玉米淀粉。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤s3中，所述二级种培养液的接种量为10-15％(v/v)。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤s3中，所述发酵培养基由酵母粉、蛋白...

【专利技术属性】
技术研发人员：李兆丰，宁甜甜，李才明，班宵逢，顾正彪，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：