一种脯氨酸羟化酶P4H突变体及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种脯氨酸羟化酶P4H突变体及其应用，所述的脯氨酸羟化酶P4H突变体以SEQ ID NO:1为基础序列，并通过基因工程手段改造后的包含单个或多个氨基酸残基的改变的突变体。所述的脯氨酸羟化酶P4H突变体可以L‑哌啶甲酸为底物酶催化合成顺式‑5‑羟基哌啶‑2‑甲酸中的应用。与野生型脯氨酸羟化酶L‑哌啶甲酸(SEQ ID NO:1)相比，显著提升了催化活性，以及提升了L‑哌啶甲酸完全转化为顺式‑5‑羟基哌啶‑2‑甲酸，且ee值高达99.92％。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物催化，具体地说，涉及一种脯氨酸羟化酶p4h突变体及其应用。

技术介绍

1、脯氨酸的衍生物是药物合成的重要结构单元，尤其羟脯氨酸在自然界中属于稀有氨基酸，是很多重要药物合成的起始原料。根据脯氨酸羟化位置及空间结构的不同，羟脯氨酸共有8种异构体，其中3-羟基-l-脯氨酸和4-羟基-l-脯氨酸作为抗生素、酶抑制剂、抗肿瘤、抗高血压及新型胃药等多种药物的重要原料，是目前生物合成研究的热点。除此之外，羟脯氨酸也可以是天然产物的来源或经化学合成，比如可以是植物材料和胶原蛋白的水解产物，或者以烯丙基溴和二乙基乙酰氨基丙二酸，d-谷氨酸和β-丙氨酸为起始原料进行化学合成。

2、同样的，羟脯氨酸的衍生物l-羟基哌啶酸也是药物合成的重要结构单元，是β-内酰胺酶抑制剂和tnf-α转化酶抑制剂合成的重要中间体。l-羟基哌啶酸同样可以通过植物或其他自然材料分离或者通过化学合成的方法来制备。但是需要复杂的分离纯化方法或者是复杂的合成步骤，很难实现大规模的工业化生产。而通过羟化酶对哌啶酸进行羟基化是获得羟基哌啶酸的理想方法。目前应用最多的酶为脯氨酸羟化酶，本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种脯氨酸羟化酶P4H突变体，其特征在于：所述突变体的氨基酸序列与SEQ IDNO.1相比，存在第68位氨基酸残基差异；和/或第286位氨基酸残基差异。

2.如权利要求1所述的脯氨酸羟化酶P4H突变体，其特征在于：所述第68位氨基酸残基差异为R68N；第286位氨基酸残基差异为A286K。

3.如权利要求1所述的脯氨酸羟化酶P4H突变体，其特征在于：所述脯氨酸羟化酶P4H突变体的氨基酸序列与SEQ ID NO.2～3之一所示的氨基酸序列具有95％以上同源性，优选为96％的同源性，更优选为97％，98％，99％或100％的同源性的氨基酸序列。

4.如...

【技术特征摘要】

1.一种脯氨酸羟化酶p4h突变体，其特征在于：所述突变体的氨基酸序列与seq idno.1相比，存在第68位氨基酸残基差异；和/或第286位氨基酸残基差异。

2.如权利要求1所述的脯氨酸羟化酶p4h突变体，其特征在于：所述第68位氨基酸残基差异为r68n；第286位氨基酸残基差异为a286k。

3.如权利要求1所述的脯氨酸羟化酶p4h突变体，其特征在于：所述脯氨酸羟化酶p4h突变体的氨基酸序列与seq id no.2～3之一所示的氨基酸序列具有95％以上同源性，优选为96％的同源性，更优选为97％，98％，99％或100％的同源性的氨基酸序列。

4.如权利要求1所述的脯氨酸羟化酶p4h突变体，其特征在于：编码所述脯氨酸羟化酶p4h突变体核苷酸序列与seq id no.4～5之一所示的序列具有95％以上同源性，优选为96％的同源性，更优选为97％，98％，99％或100％的同源性的核苷酸序列。

5.编码如权利要求1所述脯氨酸羟化酶p4h突变体的基因。

6.如权利要求5所述的编码基因，其特征在于所述编码基因核苷酸序列与seq id no.4～5之一所示的序列具有95％以上同源性，优选为96％的同源性，更优选为97％，98％，99％或100％的同源性的核苷酸序列。

7.含有权利要求5或6所述编码基因的重组表达载体。

8.根据权利要求7所述的重组表达载体，其特征在于：所述重组表达载体选自pet28a、pet21a、pet21b、pet30a。

9.一种基...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈伟，侯亚茹，张琨，池骋，徐碧锐，安正方，
申请(专利权)人：杭州善泰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：