一种采用生物膜干涉技术验证抗体亲和富集可行性的方法及其应用技术

本发明专利技术提供了一种采用生物膜干涉技术验证抗体亲和富集可行性的方法及其应用，包括：采用生物素标记Anti‑CHO HCP抗体，所述生物素与抗体的摩尔比为1:(1‑10)；采用检测缓冲液润湿传感器，平衡传感器，并将所述生物素标记的抗体采用链酶亲和素固定在传感器上；将一系列浓度梯度HCP蛋白溶液与所述生物素标记的抗体结合；采用洗脱缓冲液洗脱HCP蛋白；统计上述步骤中Octet系统采集的数据，亲和素探针抓取生物素化抗体、以及结合HCP蛋白均有明显的上升信号，并且经过洗脱后的HCP蛋白信号与起始点信号一致；证明抗体亲和富集的可行性及准确性；所述抗体亲和富集的方法为链霉素亲和素磁珠结合实验方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物，具体涉及一种采用生物膜干涉技术验证抗体亲和富集可行性的方法及其应用。

技术介绍

1、生物制品中的宿主细胞残留蛋白(hcp，host cell protein)会导致过敏反应或潜在毒性等不良临床反应风险，因此必须建立合适的hcp检测验证方法来严格控制生物制品的质量。当前，广泛被使用于hcp检测的方法是双抗体夹心酶联免疫法(elisa)，但不是所有hcps都可以作为抗原产生抗体，由于hcp成分不一、每一种蛋白成分含量也不一致，作为免疫原产生抗体的能力也不相同，所以由此制备的抗hcp抗体并不能完全检测hcp中所有成分，因此会有“漏检”，所以需要评估hcp elisa试剂盒中抗体的覆盖率(coverage)。为评估hcp elisa检测试剂盒中多克隆抗体的覆盖率，本领域已经开发了各种技术，包括：采用双向电泳(two-dimensional electrophoresis，2-de)和蛋白质免疫印迹(western blot，wb)技术结合的方法、采用荧光差异印迹电泳技术(2d-dibe，differential in blotelectroph本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种采用生物膜干涉技术验证抗体亲和富集可行性的方法，其特征在于，所述方法包括：

2.根据权利要求1所述的采用生物膜干涉技术验证抗体亲和富集可行性的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述生物素包括：生物素N-羟基磺基琥珀酰亚胺酯；

3.根据权利要求1或2所述的采用生物膜干涉技术验证抗体亲和富集可行性的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述检测缓冲液按浓度计包括：PBS+0.02-0.1％Tween-20；

4.根据权利要求1-3中任一项所述的采用生物膜干涉技术验证抗体亲和富集可行性的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述生物素标记的Anti-CHO HCP...

【技术特征摘要】

1.一种采用生物膜干涉技术验证抗体亲和富集可行性的方法，其特征在于，所述方法包括：

2.根据权利要求1所述的采用生物膜干涉技术验证抗体亲和富集可行性的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述生物素包括：生物素n-羟基磺基琥珀酰亚胺酯；

3.根据权利要求1或2所述的采用生物膜干涉技术验证抗体亲和富集可行性的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述检测缓冲液按浓度计包括：pbs+0.02-0.1％tween-20；

4.根据权利要求1-3中任一项所述的采用生物膜干涉技术验证抗体亲和富集可行性的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述生物素标记的anti-cho hcp抗体固定后，还包括模拟剧烈清洗的步骤；

5.根据权利要求1-4中任一项所述的采用生物膜干涉技术验证抗体亲和富集可行性的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述hcp蛋白的浓度范围为50-1000nm；

6.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑海峰，李台格，刘彬，林军，阚子义，罗顺，
申请(专利权)人：上海澳斯康生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：