【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
技术实现思路
【技术保护点】
1.一种用于AAV产生的工程化细胞，其包含一个或多个稳定整合的多核酸，所述多核酸共同包含编码以下的每一个的核酸序列：Rep52或Rep40；Rep78或Rep68；E2A；E4Orf6；VARNA；VP1；VP2；VP3；和AAP；其至少一个可操作地连接至化学诱导型启动子；其中：
2.根据权利要求1所述的工程化细胞，其中工程化细胞包含化学诱导型启动子，所述化学诱导型启动子包含SEQ ID NO:1-9中一个或多个的核酸序列，所述化学诱导型启动子可操作地连接至编码Rep52、Rep40、Rep78、Rep68、E2A、E4Orf6、VARNA、SC-VP1、...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种用于aav产生的工程化细胞，其包含一个或多个稳定整合的多核酸，所述多核酸共同包含编码以下的每一个的核酸序列：rep52或rep40；rep78或rep68；e2a；e4orf6；varna；vp1；vp2；vp3；和aap；其至少一个可操作地连接至化学诱导型启动子；其中：
2.根据权利要求1所述的工程化细胞，其中工程化细胞包含化学诱导型启动子，所述化学诱导型启动子包含seq id no:1-9中一个或多个的核酸序列，所述化学诱导型启动子可操作地连接至编码rep52、rep40、rep78、rep68、e2a、e4orf6、varna、sc-vp1、vp2、vp3和aap中至少一个的核酸序列。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的工程化细胞，其中工程化细胞包含至少两个化学诱导型启动子，其中至少两个化学诱导型启动子的两个或多个包含相同的核酸序列。
4.根据权利要求3所述的工程化细胞，其中至少两个化学诱导型启动子中的每一个都包含相同的核酸序列。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的工程化细胞，其中工程化细胞包含编码rep52的核酸序列，所述核酸序列可操作地连接至化学诱导型启动子，所述化学诱导型启动子包含seqid no:1-9中一个或多个的核酸序列，任选地其中rep52包含seq id no:18的氨基酸序列，任选地其中编码rep52的核酸序列包含seq id no:19的核酸序列。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的工程化细胞，其中工程化细胞包含编码rep40的核酸序列，所述核酸序列可操作地连接至化学诱导型启动子，所述化学诱导型启动子包含seqid no:1-9中一个或多个的核酸序列，任选地其中rep40包含seq id no:20的氨基酸序列。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的工程化细胞，其中工程化细胞包含编码rep78的核酸序列，所述核酸序列可操作地连接至化学诱导型启动子，所述化学诱导型启动子包含seqid no:1-9中一个或多个的核酸序列，任选地其中rep78包含seq id no:22的氨基酸序列，任选地其中编码rep78的核酸序列包含seq id no:23的核酸序列。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的工程化细胞，其中工程化细胞包含编码rep68的核酸序列，所述核酸序列可操作地连接至化学诱导型启动子，所述化学诱导型启动子包含seqid no:1-9中一个或多个的核酸序列，任选地其中rep68包含seq id no:27的氨基酸序列，任选地其中编码rep68的核酸序列包含seq id no:28的核酸序列。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的工程化细胞，其中工程化细胞包含编码e2a的核酸序列，所述核酸序列可操作地连接至化学诱导型启动子，所述化学诱导型启动子包含seqid no:1-9中一个或多个的核酸序列，任选地其中e2a包含seq id no:31的氨基酸序列。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的工程化细胞，其中工程化细胞包含编码e4orf6的核酸序列，所述核酸序列可操作地连接至化学诱导型启动子，所述化学诱导型启动子包含seq id no:1-9中一个或多个的核酸序列，任选地其中e4orf6包含seq id no:35的氨基酸序列，任选地其中编码e4orf6的核酸序列包含seq id no:36的核酸序列。
11.根据权利要求1-10中任一项所述的工程化细胞，其中工程化细胞包含编码varna的核酸序列，所述核酸序列可操作地连接至化学诱导型启动子，所述化学诱导型启动子包含seq id no:1-9中一个或多个的核酸序列，任选地其中varna包含seq id no:38的核酸序列。
12.根据权利要求1-11中任一项所述的工程化细胞，其中工程化细胞包含编码vp1的核酸序列，所述核酸序列可操作地连接至化学诱导型启动子，所述化学诱导型启动子包含seqid no:1-9中一个或多个的核酸序列，任选地其中vp1包含seq id no:31的氨基酸序列，任选地其中编码vp1的核酸序列包含seq id no:32的核酸序列。
13.根据权利要求1-12中任一项所述的工程化细胞，其中工程化细胞包含编码vp2的核酸序列，所述核酸序列可操作地连接至化学诱导型启动子，所述化学诱导型启动子包含seqid no:1-9中一个或多个的核酸序列，任选地其中vp2包含seq id no:33的氨基酸序列。
14.根据权利要求1-13中任一项所述的工程化细胞，其中工程化细胞包含编码vp3的核酸序列，所述核酸序列可操作地连接至化学诱导型启动子，所述化学诱导型启动子包含seqid no:1-9中一个或多个的核酸序列，任选地其中vp3包含seq id no:35的氨基酸序列。
15.根据权利要求1-14中任一项所述的工程化细胞，其中工程化细胞包含编码aap的核酸序列，所述核酸序列可操作地连接至化学诱导型启动子，所述化学诱导型启动子包含seqid no:1-9中一个或多个的核酸序列，任选地其中aap包含seq id no:37的氨基酸序列。
16.根据权利要求1-15中任一项所述的工程化细胞，其中工程化细胞包含第一稳定整合的多核酸，其中第一稳定整合的多核酸包含编码rep52或rep40的核酸序列以及编码rep78或rep68的核酸序列。
17.根据权利要求16所述的工程化细胞，其中第一稳定整合的多核酸包含编码rep52的核酸序列以及编码rep78或rep68的核酸序列。
18.根据权利要求17所述的工程化细胞，其中编码rep52的核酸序列以及编码rep78或rep68的核酸序列各自可操作地连接至第一化学诱导型启动子。
19.根据权利要求18所述的工程化细胞，其中第一化学诱导型启动子包含seq id no:1-9中一个或多个的核酸序列。
20.根据权利要求16-19中任一项所述的工程化细胞，其中第一稳定整合的多核酸进一步包含编码内部核糖体进入位点(ires)或2a肽的核酸序列。
21.根据权利要求20所述的工程化细胞，其中编码ires或2a肽的核酸序列将编码rep52的核酸序列与编码rep78或rep68的核酸序列隔开。
22.根据权利要求16-21中任一项所述的工程化细胞，其中第一稳定整合的多核酸进一步包含可操作地连接至启动子的选择标记。
23.根据权利要求1-22中任一项所述的工程化细胞，其中工程化细胞包含第二稳定整合的多核酸，其中第二稳定整合的多核酸包含编码e2a的核酸序列、编码e4orf6的核酸序列以及编码varna的核酸序列。
24.根据权利要求23所述的工程化细胞，其中编码e2a的核酸序列、编码e4orf6的核酸序列以及编码varna的核酸序列各自可操作地连接至第二化学诱导型启动子。
25.根据权利要求24所述的工程化细胞，其中第二化学诱导型启动子包含seq id no:1-9中一个或多个的核酸序列。
26.根据权利要求23-25中任一项所述的工程化细胞，其中第二稳定整合的多核酸进一步包含编码内部核糖体进入位点(ires)或2a肽的核酸序列。
27.根据权利要求26所述的工程化细胞，其中编码ires或2a肽的核酸序列将编码e2a的核酸序列与编码e4orf6的核酸序列隔开。
28.根据权利要求23-27中任一项所述的工程化细胞，其中第二稳定整合的多核酸进一步包含可操作地连接至启动子的选择标记。
29.根据权利要求1-28中任一项所述的工程化细胞，其中工程化细胞包含第三稳定整合的多核酸，其中第三稳定整合的多核酸包含编码vp1的核酸序列、编码vp2的核酸序列、编码vp3的核酸序列以及编码aap的核酸序列。
30.根据权利要求29所述的工程化细胞，其中编码vp1的核酸序列可操作地连接至第三化学诱导型启动子，并且编码vp2的核酸序列、编码vp3的核酸序列以及编码aap的核酸序列各自可操作地连接至第四化学诱导型启动子。
31.根据权利要求30所述的工程化细胞，其中第三化学诱导型启动子包含seq id no:1-9中一个或多个的核酸序列。
32.根据权利要求30或权利要求31所述的工程化细胞，其中第四化学诱导型启动子包含seq id no:1-9中一个或多个的核酸序列。
33.根据权利要求29-32中任一项所述的工程化细胞，其中第三稳定整合的多核酸进一步包含可操作地连接至启动子的选择标记。
34.根据权利要求1-33中任一项所述的工程化细胞，其中工程化细胞包含第四稳定整合的多核酸，其中第四稳定整合的多核酸包含编码转录激活子的核酸序列，所述转录激活子当在小分子诱导物存在下表达时，与工程化细胞的化学诱导型启动子结合。
35.根据权利要求34所述的工程化细胞，其中转录激活子包含seq id no:10-16中任一个的氨基酸序列。
36.根据权利要求34或权利要求35所述的工程化细胞，其中第四稳定整合的多核苷酸分子进一步包含可操作地连接至启动子的选择标记。
37.根据权利要求1-36中任一项所述的工程化细胞，其中工程化细胞进一步包含稳定的着陆点。
38.根据权利要求1-37中任一项所述的工程化细胞，其中工程化细胞源自hek293细胞、hela细胞、bhk细胞或sf9细胞。
39.一种用于腺相关病毒(aav)产生的工程化细胞，其包含一个或多个稳定整合的多核苷酸，所述多核苷酸共同包含编码以下的每一个的核酸序列：rep52或rep40；rep78或rep68；e2a；e4orf6；varna；vp1；vp2；vp3；和aap；其每一个可操作地连接至化学诱导型启动子。
40.根据权利要求39所述的工程化细胞，其中工程化细胞包含化学诱导型启动子，所述化学诱导型启动子包含seq id no:1-9中一个或多个的核酸序列，所述化学诱导型启动子可操作地连接至编码rep52、rep40、rep78、rep68、e2a、e4orf6、varna、vp1、vp2、vp3和aap中至少一个的核酸序列。
41.根据权利要求39或权利要求40所述的工程化细胞，其中工程化细胞包含至少两个化学诱导型启动子，其中至少两个化学诱导型启动子的两个或多个包含相同的核酸序列。
42.根据权利要求41所述的工程化细胞，其中至少两个化学诱导型启动子中的每一个都包含相同的核酸序列。
43.根据权利要求39-42中任一项所述的工程化细胞，其中工程化细胞包含编码rep52的核酸序列，所述核酸序列可操作地连接至化学诱导型启动子，所述化学诱导型启动子包含seq id no:1-9中一个或多个的核酸序列，任选地其中rep52包含seq id no:18的氨基酸序列。
44.根据权利要求39-43中任一项所述的工程化细胞，其中工程化细胞包含编码rep40的核酸序列，所述核酸序列可操作地连接至化学诱导型启动子，所述化学诱导型启动子包含seq id no:1-9中一个或多个的核酸序列，任选地其中rep40包含seq id no:20的氨基酸序列。
45.根据权利要求39-44中任一项所述的工程化细胞，其中工程化细胞包含编码rep78的核酸序列，所述核酸序列可操作地连接至化学诱导型启动子，所述化学诱导型启动子包含seq id no:1-9中一个或多个的核酸序列，任选地其中rep78包含seq id no:21或22中任一个的氨基酸序列。
46.根据权利要求39-45中任一项所述的工程化细胞，其中工程化细胞包含编码rep68的核酸序列，所述核酸序列可操作地连接至化学诱导型启动子，所述化学诱导型启动子包含seq id no:1-9中一个或多个的核酸序列，任选地其中rep68包含seq id no:26或27中任一个的氨基酸序列。
47.根据权利要求39-46中任一项所述的工程化细胞，其中工程化细胞包含编码e2a的核酸序列，所述核酸序列可操作地连接至化学诱导型启动子，所述化学诱导型启动子包含seq id no:1-9中一个或多个的核酸序列，任选地其中e2a包含seq id no:29的氨基酸序列。
48.根据权利要求39-47中任一项所述的工程化细胞，其中工程化细胞包含编码e4orf6的核酸序列，所述核酸序列可操作地连接至化学诱导型启动子，所述化学诱导型启动子包含seq id no:1-9中一个或多个的核酸序列，任选地其中e4orf6包含seq id no:35的氨基酸序列。
49.根据权利要求39-48中任一项所述的工程化细胞，其中工程化细胞包含编码varna的核酸序列，所述核酸序列可操作地连接至化学诱导型启动子，所述化学诱导型启动子包含seq id no:1-9中一个或多个的核酸序列，任选地其中varna包含seq id no:38的核酸序列。
50.根据权利要求39-49中任一项所述的工程化细胞，其中工程化细胞包含编码vp1的核酸序列，所述核酸序列可操作地连接至化学诱导型启动子，所述化学诱导型启动子包含seq id no:1-9中一个或多个的核酸序列，任选地其中vp1包含seq id no:30或31中任一个的氨基酸序列。
51.根据权利要求39-50中任一项所述的工程化细胞，其中工程化细胞包含编码vp2的核酸序列，所述核酸序列可操作地连接至化学诱导型启动子，所述化学诱导型启动子包含seq id no:1-9中一个或多个的核酸序列，任选地其中vp2包含seq id no:33的氨基酸序列。
52.根据权利要求39-51中任一项所述的工程化细胞，其中工程化细胞包含编码vp3的核酸序列，所述核酸序列可操作地连接至化学诱导型启动子，所述化学诱导型启动子包含seq id no:1-9中一个或多个的核酸序列，任选地其中vp3包含seq id no:34的氨基酸序列。
53.根据权利要求39-52中任一项所述的工程化细胞，其中工程化细胞包含编码aap的核酸序列，所述核酸序列可操作地连接至化学诱导型启动子，所述化学诱导型启动子包含seq id no:1-9中一个或多个的核酸序列，任选地其中aap包含seq id no:37的氨基酸序列。
54.根据权利要求39-53中任一项所述的工程化细胞，其中工程化细胞包含第一稳定整合的多核酸，其中第一稳定整合的多核酸包含编码rep52或rep40的核酸序列以及编码rep78或rep68的核酸序列。
55.根据权利要求54所述的工程化细胞，其中编码rep52或rep40的核酸序列以及编码rep78或rep68的核酸序列各自可操作地连接至第一化学诱导型启动子。
56.根据权利要求55所述的工程化细胞，其中第一化学诱导型启动子包含seq id no:1-9中一个或多个的核酸序列。
57.根据权利要求54-56中任一项所述的工程化细胞，其中第一稳定整合的多核酸进一步包含编码内部核糖体进入位点(ires)的核酸序列。
58.根据权利要求57所述的工程化细胞，其中编码ires的核酸序列将编码rep52或rep40的核酸序列与编码rep78或rep68的核酸序列隔开。
59.根据权利要求54-58中任一项所述的工程化细胞，其中第一稳定整合的多核酸进一步包含可操作地连接至启动子的选择标记。
60.根据权利要求39-59中任一项所述的工程化细胞，其中工程化细胞包含第二稳定整合的多核酸，其中第二稳定整合的多核酸包含编码e2a、e4orf6和varna的核酸序列。
61.根据权利要求60所述的工程化细胞，其中编码e2a、e4orf6和varna的核酸序列各自可操作地连接至第二化学诱导型启动子。
62.根据权利要求61所述的工程化细胞，其中第二化学诱导型启动子包含seq id no:1-9中一个或多个的核酸序列。
63.根据权利要求60-62中任一项所述的工程化细胞，其中第二稳定整合的多核酸进一步包含编码ires的核酸序列。
64.根据权利要求63所述的工程化细胞，其中编码ires的核酸序列将编码e2a的核酸序列与编码e4orf6的核酸序列隔开。
65.根据权利要求60-64中任一项所述的工程化细胞，其中第二稳定整合的多核酸进一步包含可操作地连接至启动子的选择标记。
66.根据权利要求39-65中任一项所述的工程化细胞，其中工程化细胞包含第三稳定整合的多核酸，其中第三稳定整合的多核酸包含编码vp1、vp2、vp3和aap的核酸序列。
67.根据权利要求66所述的工程化细胞，其中第三稳定整合的多核酸进一步包含可操作地连接至启动子的选择标记。
68.根据权利要求66或权利要求67所述的工程化细胞，其中编码vp1、vp2、vp3和aap的核酸序列各自可操作地连接至第三化学诱导型启动子。
69.根据权利要求68所述的工程化细胞，其中第三化学诱导型启动子包含seq id no:1-9中一个或多个的核酸序列。
70.根据权利要求39-69中任一项所述的工程化细胞，其进一步包含第四稳定整合的多核酸，其中第四稳定整合的多核酸包含编码转录激活子的核酸序列，所述转录激活子当在小分子诱导物存在下表达时，与工程化细胞的化学诱导型启动子结合。
71.根据权利要求70所述的工程化细胞，其中转录激活子包含seq id no:10-16中任一个的氨基酸序列。
72.根据权利要求70或权利要求71所述的工程化细胞，其中第四稳定整合的多核酸进一步包含可操作地连接至启动子的选择标记。
73.根据权利要求39-72中任一项所述的工程化细胞，其中工程化细胞进一步包含稳定的着陆点。
74.根据权利要求39-73中任一项所述的工程化细胞，其中工程化细胞源自hek293细胞、hela细胞、bhk细胞或sf9细胞。
75.一种试剂盒，其包...
【专利技术属性】
技术研发人员：C·S·斯塔奇，A·A·K·尼尔森，
申请(专利权)人：阿西莫夫公司，
类型：发明
国别省市：
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