一种百合细胞融合的方法技术

本发明专利技术公开了一种百合细胞融合的方法，该百合细胞融合的方法包含以下步骤：1)溶液配制：CPW盐溶液：含(KH<subgt;2</subgt;PO<subgt;4</subgt;27.2mg·L<supgt;‑1</supgt;、KNO<subgt;3</subgt;101.0mg·L<supgt;‑1</supgt;、CaCl<subgt;2</subgt;·2H<subgt;2</subgt;O 1480.0mg·L<supgt;‑1</supgt;、MgSO<subgt;4</subgt;·7H<subgt;2</subgt;O 246.0mg·L<supgt;‑1</supgt;、CuSO<subgt;4</subgt;·5H<subgt;2</subgt;O 0.025mg·L<supgt;‑1</supgt;、KI 0.16mg·L<supgt;‑1</supgt;)；原生质体洗涤液：取13g甘露醇溶解于CPW盐溶液中，定容至100mL；原生质体悬浮液：含有28％蔗糖的CPW盐溶液，pH 6.0；酶解液：1.0％纤维素酶+0.5％离析酶+0.1％果胶酶+10.0mmo l·L<supgt;‑1</supgt;CaCl<subgt;2</subgt;·2H<subgt;2</subgt;O+20.0mmo l·L<supgt;‑1</supgt;MES+20.0mmo l·L<supgt;‑1</supgt;KCl溶解于原生质体洗涤液中，加水定容至10mL；2)原生质体的分离和纯化：取洗净晾干的湖北百合与兰州百合叶片，本百合细胞融合的方法融合同步性好，可在显微镜下观察到全过程，融合后稳定性高，对原材料无特殊要求。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及细胞融合，具体为一种百合细胞融合的方法。

技术介绍

1、湖北百合其紫色鳞茎百合在市场上难以被消费者接受，但因其花色艳丽，抗性和适应性强，广泛用于庭院栽培。兰州百合其鳞茎洁白如玉，含糖量高，形大味甜，肉质细腻，品质佳，广受欢迎，但其抗性弱，生产上易出现自交不亲和性，因此，根据湖北百合与兰州百合优缺点互补的特性,本研究以体细胞杂交技术来克服远源杂交障碍,育成多花型，花色丰富,集观赏、抗性及药用、食用为一体的百合新品种,丰富园林地被植物的种类。还能为百合种间杂交和品种改良奠定基础，为使野生百合的优势变为商品优势，培育出具有本土特色的百合新品种，为实现国产百合国际化，提供理论基础。

2、目前细胞融合可以在peg溶液中加入融合促进剂(如二甲基亚砜、亚精胺、精胺、胰蛋白酶等)，可有效提高融合频率，但由于peg法处理时间长、诱导液浓度不易掌握、peg分子量等因素，易形成多元融合物，对细胞损伤大，易残留毒性，融合率较低等有待进一步改善，为此，我们提出一种百合细胞融合的方法。

技术实现思路p>

1、本专利本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种百合细胞融合的方法，其特征在于：该百合细胞融合的方法包含以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种百合细胞融合的方法，其特征在于：步骤1)中原生质体洗涤液保持pH值5.8，高压灭菌，4℃保存备用。

3.根据权利要求1所述的一种百合细胞融合的方法，其特征在于：步骤1)中酶解液55℃水浴10min，调节pH值至5.8。

4.根据权利要求1所述的一种百合细胞融合的方法，其特征在于：步骤3)中电融合液配制为0.6mol·L-1甘露醇和1mmol·L-1CaCl2等体积混匀。

5.根据权利要求1所述的一种百合细胞融合的方法，其特征在于：步骤2)...

【技术特征摘要】

1.一种百合细胞融合的方法，其特征在于：该百合细胞融合的方法包含以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种百合细胞融合的方法，其特征在于：步骤1)中原生质体洗涤液保持ph值5.8，高压灭菌，4℃保存备用。

3.根据权利要求1所述的一种百合细胞融合的方法，其特征在于：步骤1)中酶解液55℃水浴10min，调节ph值至5.8。

4.根据权利要求1所述的一种百合细胞融合的方法，其特征在于：步骤3)中电融合液配制为0.6mol·l-...

【专利技术属性】
技术研发人员：钟程，田鑫，唐其蔚，
申请(专利权)人：凯里学院，
类型：发明
国别省市：