一种鉴定CreERT2示踪小鼠荧光丢失的策略的方法技术

本发明专利技术公开了一种鉴定CreERT2示踪小鼠荧光丢失的策略的方法，包括以下步骤，步骤一：给出生后5天的Sox9creERT；R26zsgreen小鼠腹腔注射他莫昔芬标记，一周后股骨头取材，流式分选CD45阳性造血细胞、CD31阳性血管内皮细胞，提取基因组；步骤二：根据LoxP‑Stop‑LoxP终止密码子序列及Cre酶剪切原理设计上下游引物；步骤三：PCR鉴定实验组和对照组终止密码子序列剪切情况。本发明专利技术基于Cre‑LoxP位点特异性重组系统的原理，被剪切的细胞及其分化的下游细胞均不含终止密码子序列，在Loxp两侧设计引物通过PCR鉴定终止密码子序列有无来示踪下游分化的细胞来源。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物，尤其是一种鉴定creert2示踪小鼠荧光丢失的策略的方法。

技术介绍

1、遗传谱系示踪技术(genetic lineage tracing)是一种利用cre-loxp位点特异性重组系统对细胞命运进行追踪展示的方法，用于揭示特定类型细胞在发育、疾病和再生中自我更新、分化和转分化的现象。

2、将人雌激素受体(estrogen receptor，简称er)的配体结合区(lbd)与cre重组酶相融合，形成定位于胞浆中的融合蛋白(cre-er)。只有在雌激素诱导后，融合的cre-er蛋白才会通过构象变化从锚定蛋白hsp90上解离下来，进入细胞核，识别loxp位点并将两个loxp位点之间的终止密码子序列切除，从而使含有cre-er的细胞类群表达出报告基因。这样就通过控制雌激素的注射时间，可以实现对基因重组时间特异性的调控。

3、尽管基于cre-loxp系统的遗传谱系示踪技术是研究发育、疾病、再生等过程细胞命运可塑性的强大利器，但是它本身也存在着技术瓶颈。在研究股骨头次级骨化中心骨髓形成过程中，通过免疫荧光染色、激光共聚焦显微本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种鉴定CreERT2示踪小鼠荧光丢失的策略的方法，其特征是：包括以下步骤，

2.根据权利要求1所述的一种鉴定CreERT2示踪小鼠荧光丢失的策略的方法，其特征是：步骤一中使用免疫荧光对出生后5天小鼠腹腔注射他莫昔芬标记一周后的Sox9creERT；R26zsgreen小鼠股骨头染色，并用激光共聚焦成像发现部分造血细胞、血管细胞荧光丢失。

3.根据权利要求2所述的一种鉴定CreERT2示踪小鼠荧光丢失的策略的方法，其特征是：步骤一中免疫荧光染色时，一抗与二抗比例为1:400。

4.根据权利要求2所述的一种鉴定CreERT2示踪小鼠荧光丢失的策略的方...

【技术特征摘要】

1.一种鉴定creert2示踪小鼠荧光丢失的策略的方法，其特征是：包括以下步骤，

2.根据权利要求1所述的一种鉴定creert2示踪小鼠荧光丢失的策略的方法，其特征是：步骤一中使用免疫荧光对出生后5天小鼠腹腔注射他莫昔芬标记一周后的sox9creert；r26zsgreen小鼠股骨头染色，并用激光共聚焦成像发现部分造血细胞、血管细胞荧光丢失。

3.根据权利要求2所述的一种鉴定creert2示踪小鼠荧光丢失的策略的...

【专利技术属性】
技术研发人员：史文炯，董锐，陈润峰，唐博，
申请(专利权)人：重庆国际免疫创新中心有限公司，
类型：发明
国别省市：