一种基于HCR辅助RTF-EXPAR的H1N1流感病毒检测方法技术

本发明专利技术提供一种基于HCR辅助RTF‑EXPAR的H1N1流感病毒检测方法，首先，将H1N1流感病毒的RNA通过等温指数扩增方式转化为DNA产物参与后续反应；其次，设计了参与杂交链式反应(HCR)的生物素修饰的发卡结构探针，该反应由无需逆转录的指数扩增反应(RTF‑EXPAR)产物触发，并以其介导使HCR产物被固定于横向流动试纸条检测线上的核酸特异性捕获。进一步将链霉亲和素(SA)与信号标签偶联，并与HCR的核酸产物中修饰的生物素结合，从而产生级联放大的荧光信号。最后，在紫外手电筒的照射下，既可以直接采用肉眼观察试纸条上条带的荧光强弱，对H1N1流感进行定性诊断；也可利用软件分析智能手机记录的荧光图像，实现H1N1流感病毒的定量检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种用于医学检验领域的病原体核酸便携式检测方法，具体涉及一种基于hcr辅助rtf-expar的h1n1流感病毒检测方法。

技术介绍

1、通过在哺乳动物细胞或鸡胚中培养扩增病毒是最传统的流感诊断方法，检测结果可靠性强，但操作繁琐、费时、生物安全性较低。目前，常用于检测流感病毒抗原的方法有直接荧光抗体检测法(dfa)，也称免疫荧光抗体测试(ifa)和流感快速诊断法(ridts)。dfa通过荧光标记的抗体对鼻咽拭子的呼吸道上皮细胞进行染色，在荧光显微镜下镜检的灵敏度约为60％-80％。不过，该技术无法进一步鉴定流感病毒的亚型。ridts采用胶体金或彩色乳胶颗粒标记，利用免疫色谱法或侧向层析技术的原理靶向病毒核蛋白。但ridts的灵敏度有限，仅得到定性或半定量结果。流感病毒血清学诊断对于采集的血清样本要求较高，且需要包括患者急性期和恢复期双份血清。此外，患者血液中的病毒抗体滴度大多在发病两周后才有明显提高，这些都限制了其实际应用。分子生物学的进一步发展彻底改变了流感病毒诊断领域。其中，rt-pcr已在全球大多数实验室诊断中取代以往经典的病毒分离法，成本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于HCR辅助RTF-EXPAR的H1 N1流感病毒检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种基于HCR辅助RTF-EXPAR的H1 N1流感病毒检测方法，其特征在于，所述发卡结构探针为茎环发夹结构，所述捕获探针为单链结构。

3.根据权利要求1所述的一种基于HCR辅助RTF-EXPAR的H1 N1流感病毒检测方法，其特征在于，所述信号标签为量子点。

4.一种基于HCR辅助RTF-EXPAR的H1 N1流感病毒检测试纸，包括硝酸纤维素膜、玻璃纤维样品垫、吸水垫和PVC底板，其特征在于，所述硝酸纤维素膜上涂有捕获探针与链霉亲...

【技术特征摘要】

1.一种基于hcr辅助rtf-expar的h1 n1流感病毒检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种基于hcr辅助rtf-expar的h1 n1流感病毒检测方法，其特征在于，所述发卡结构探针为茎环发夹结构，所述捕获探针为单链结构。

3.根据权利要求1所述的一种基于hcr辅助rtf-expar的h1 n1流感病毒检测方法，其特征在于，所述信号标签为量子点。

4.一种基于hcr辅助rtf-expar的h1 n1流感病毒检测试纸，包括硝酸纤维素膜、玻璃纤维样品垫、吸水垫和pvc底板，其特征在于，所述硝酸纤维素膜上涂有捕获探针与链霉亲和素偶联生成的捕获探针-sa复合物，以及生物素与牛血清白蛋白偶联生成的生物素-bsa，分别形成检测线和质控线；所述捕获探针能够与dna产物特异性互补，其制备方法为：将h1 n1流感病毒的rna通过等温指数扩增方式转化为dna产物；根据dna产物设计捕获探针。

5.根据权利要求4所述的试纸，其特征在于，其组装步骤包括：

6.基于权利要求4或5任一所述试纸的h1 n1流感病毒检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

7.根据权利要求6所...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴丽，朱亦丹，秦玉岭，顾锡娟，蒋汶君，
申请(专利权)人：南通大学，
类型：发明
国别省市：