新型高产病毒载体包装细胞系的构建制造技术

技术编号:42698618 阅读:25 留言:0更新日期:2024-09-13 11:54
本发明专利技术提供了一种新型宿主细胞及其改造方法,可用于高效率制备重组病毒载体、重组蛋白或外泌体。本发明专利技术还提供了一种经过改造以过表达鸢尾素(irisin)为主要特征的宿主细胞。本专利还提供了一种高效率制备病毒载体、重组蛋白和外泌体的方法,包括1)改造宿主细胞以过表达鸢尾素(irisin);和2)共转染宿主细胞与穿梭质粒和包装质粒。本文所提供的宿主细胞和方法可用于大规模制备重组病毒载体。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】

本专利技术涉及生物细胞,具体为一种新型高产重组病毒载体包装细胞系的构建。


技术介绍

1、慢病毒载体已广泛用于细胞疗法和基因疗法(pmid:9305836)。慢病毒载体的优势在于它们能够转导广泛范围的细胞类型,包括分裂细胞和静止细胞。现在使用的慢病毒载体系统是从人类免疫缺陷病毒(hiv)中开发而来的,这使其成为将外源基因转移到t细胞中的理想载体,而t细胞是慢病毒的天然宿主,通常难以转染。因此,慢病毒载体是制备car-t细胞(pmid:27189167)的主要工具,这是一种针对肿瘤的强大免疫疗法。

2、car-t细胞(嵌合抗原受体t细胞)疗法现在是肿瘤相关疗法中的超级明星(pmid:33292660)。一般来说,car-t细胞是经过基因工程改造的t细胞,能够产生一种人工的嵌合抗原受体(car),将抗原结合和t细胞激活功能结合在一个分子中(pmid:3122749)。这些car使t细胞获得了新的结合靶蛋白(通常是肿瘤特异性抗原)的能力,并且非常适用于免疫疗法(pmid:23550147)。作为制备car-t细胞的关键步骤,应该使用慢病毒(lv)载体将本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.经过改造以过表达FNDC5或irisin的宿主细胞。

2.根据权利要求1的宿主细胞,其中改造包括将编码FNDC5或irisin的外源核酸分子引入宿主细胞中。

3.根据权利要求1或2的宿主细胞,其中宿主细胞中FNDC5或irisin的表达水平高于改造前的宿主细胞中FNDC5或irisin的表达水平,优选至少高出5倍。

4.根据权利要求1-3中的任意一项的宿主细胞,其中宿主细胞是哺乳动物细胞,优选是人类细胞,更优选是293T细胞。

5.根据权利要求1-4中的任意一项的宿主细胞,其中外源核酸分子是DNA或RNA分子。>

6.根据权利...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

1.经过改造以过表达fndc5或irisin的宿主细胞。

2.根据权利要求1的宿主细胞,其中改造包括将编码fndc5或irisin的外源核酸分子引入宿主细胞中。

3.根据权利要求1或2的宿主细胞,其中宿主细胞中fndc5或irisin的表达水平高于改造前的宿主细胞中fndc5或irisin的表达水平,优选至少高出5倍。

4.根据权利要求1-3中的任意一项的宿主细胞,其中宿主细胞是哺乳动物细胞,优选是人类细胞,更优选是293t细胞。

5.根据权利要求1-4中的任意一项的宿主细胞,其中外源核酸分子是dna或rna分子。

6.根据权利要求1-5中的任意一项的宿主细胞,其中fndc5包括seq id no:1所示的氨基酸序列或其功能变体;irisin包括seq id no:2所示的氨基酸序列或其功能变体。

7.根据权利要求1-6中的任意一项的宿主细胞,其中宿主细胞是具有cctcc no:c2021292存放编号的人类胚胎肾细胞kx293t。

8.使用权利要求1-7中的任意一项的宿主细胞作为病毒载体包装细胞系。

9.根据权利要求8的使用,其中病毒载体包装细胞系是慢病毒载体包装细胞系。

10.制备病毒载体的方法包括:

11.根据权利要求10的方法,其中改造包括将编码fndc5或irisin的外源核酸分子引入宿主细胞中。

12.根据权利要求10或11的方法,其中宿主细胞中fndc5或irisin的表达水平高于改造前的宿主细胞中fndc5或irisin的表达水平至少5倍。

13.根据权利要求10-12中的任意一项的方法,其中外源核酸分子是dna或rna分子。

14.制备病毒载体的方法包括共转染宿主细胞与穿梭质粒和包装质粒,其中穿梭质粒包含编码fndc5或irisin的序列。

15.制备病毒载体的方法包括:

16.根据权利要求10-15中的任意一项的方法,其中宿主细胞是哺乳动物细胞,优选是人类细胞,更优选是293...

【专利技术属性】
技术研发人员:周树敏
申请(专利权)人:上海市第六人民医院
类型:发明
国别省市:

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