基于OsLEC1基因在水稻愈伤组织分化应用的制作方法技术

技术编号:42698342 阅读:44 留言:0更新日期:2024-09-13 11:54
本发明专利技术公开了基于OsLEC1基因在水稻愈伤组织分化应用的制作方法,包括:选择gRNA靶位点;克隆含有gRNA的串联片段;连接各gRNA片段;对连接产物进行PCR扩增;纯化产物和目标载体的酶切;转化;农杆菌介导的水稻转基因;转基因植株的筛选与鉴定。选择gRNA靶位点具体包括如下步骤:根据CRISPR‑Cas9技术的靶位点设计原则;在靠近OsLEC1基因5’端的基因序列上设计2个gRNA靶位点。克隆含有gRNA的串联片段具体包括如下步骤:以质粒pGTR为模板。在本发明专利技术中,愈伤组织的分化直接影响了转基因的出苗效率,OsLEC1的敲除可以促进水稻愈伤组织的分化,提示它可能作为一个提高水稻乃至禾本科作物转化效率的一个重要靶标基因,可以以它为出发点来构建各种分子工具提高转化效率。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及水稻愈伤组织分化,具体是涉及基于 oslec1基因在水稻愈伤组织分化应用的制作方法。


技术介绍

1、植物组织培养技术由20世纪初发展起来,是指在无菌条件下,将离体的植物器官、组织、细胞、原生质体等在合适的条件进行离体培养,诱导产生愈伤组织、不定芽等,进一步形成完整植株的过程。

2、为了提高水稻愈伤组织的分化率,研究人员采取了一系列创新,比如采用干燥处理,辐射处理,不同激素配比,添加不同碳源,添加铜、银等元素,添加脯氨酸,添加多效唑(met)和添加活性炭等方法。干燥处理和辐射处理较费时,辐射处理方法还需要特定的仪器;添加铜、银等元素会造成额外的重金属污染等。总之上述的方法多且杂乱,且有些方法只是对某些特定植物品种有显著作用,并不适用于水稻,难以满足工作人员的需求。


技术实现思路

1、为解决上述技术问题,提供基于 oslec1基因在水稻愈伤组织分化应用的制作方法,本技术方案解决了上述
技术介绍
中提出的为了提高水稻本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.基于OsLEC1基因在水稻愈伤组织分化应用的制作方法,其特征在于,包括:

2.根据权利要求1所述的基于OsLEC1基因在水稻愈伤组织分化应用的制作方法,其特征在于,所述选择gRNA靶位点具体包括如下步骤:

3.根据权利要求2所述的基于OsLEC1基因在水稻愈伤组织分化应用的制作方法,其特征在于,所述克隆含有gRNA的串联片段具体包括如下步骤:

4.根据权利要求3所述的基于OsLEC1基因在水稻愈伤组织分化应用的制作方法,其特征在于,所述连接各gRNA片段具体包括如下步骤:

5.根据权利要求4所述的基于OsLEC1基因在水稻愈伤组织分化应...

【技术特征摘要】

1.基于oslec1基因在水稻愈伤组织分化应用的制作方法,其特征在于,包括:

2.根据权利要求1所述的基于oslec1基因在水稻愈伤组织分化应用的制作方法,其特征在于,所述选择grna靶位点具体包括如下步骤:

3.根据权利要求2所述的基于oslec1基因在水稻愈伤组织分化应用的制作方法,其特征在于,所述克隆含有grna的串联片段具体包括如下步骤:

4.根据权利要求3所述的基于oslec1基因在水稻愈伤组织分化应用的制作方法,其特征在于,所述连接各grna片段具体包括如下步骤:

5.根据权利要求4所述的基于oslec1基因在水稻愈伤组织分化应用的制作方法,其特征在于,在所述pcr仪中分别处于37℃下反应5min以及处于20℃下反应10min,并循环30-50次。

【专利技术属性】
技术研发人员:郭芾曾文卓舒庆尧
申请(专利权)人:浙江大学海南研究院
类型:发明
国别省市:

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