一种用于表达CTB蛋白的重组质粒及重组CTB蛋白的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种用于表达CTB蛋白的重组质粒，使用6×His作为纯化标签并基于此设计CTB的表达阅读框，用于表达CTB蛋白的重组质粒依次由上游限制性内切酶位点、6×His标签、TEV酶的酶切位点、表达CTB蛋白的核苷酸序列以及下游限制性内切酶位点组成；质粒骨架选择具有卡那霉素抗性基因的pET28b(+)。本发明专利技术还公开了一种重组CTB蛋白的制备方法，纯化工艺简单、成本低廉，所获最终产品纯度高、活性好。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种用于表达ctb蛋白的重组质粒及重组ctb蛋白的制备方法。

技术介绍

1、霍乱毒素(cholera toxin，ct)是霍乱弧菌产生的肠毒素，由1个a亚单位(cta)和5个b亚单位(ctb)形成的五聚体共价连接而成，cta为毒性亚单位，ctb为无毒的受体结合亚单位，可以和所有核细胞膜上的神经结苷脂(gm1)受体结合，cta通过ctb的作用进入细胞发挥其毒性作用。cta是一种adp-核糖转移酶，通过破坏g蛋白信号传导使细胞脱水。而ctb通过与神经节苷脂gm1的戊多糖链结合附于细胞表面，可被轴突末端吸收并逆向运输至胞体，进而特异高效地逆行标记神经细胞，目前已成为应用最广泛的无毒逆行示踪剂。此外，ctb可以作为外源多肽的稳定载体，与化学偶联或基因融合的抗原同时进入体内，激起融合表位抗原的免疫原性，使机体产生强烈的免疫反应，有可能达到免疫保护作用；且ctb无毒性，具有很强的免疫原性，能刺激产生黏膜iga和血清igg抗体，具有能加强抗原表位的抗原性的特点，故ctb常被选作肽疫苗的佐剂，用于强化多糖、小肽等半抗原；ctb具有很强的免疫原性，通过口服能产本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于表达CTB蛋白的重组质粒，其特征在于，使用6×His作为纯化标签并基于此设计CTB的表达阅读框，用于表达CTB蛋白的重组质粒依次由上游限制性内切酶位点、6×His标签、TEV酶的酶切位点、表达CTB蛋白的核苷酸序列以及下游限制性内切酶位点组成；质粒骨架选择具有卡那霉素抗性基因的pET28b(+)。

2.根据权利要求1所述的用于表达CTB蛋白的重组质粒，其特征在于，所述上游限制性内切酶位点为NcoI。

3.根据权利要求1所述的用于表达CTB蛋白的重组质粒，其特征在于，所述下游限制性内切酶位点为BamHI。

4.一种重组CTB蛋白的制备方法，其...

【技术特征摘要】

1.一种用于表达ctb蛋白的重组质粒，其特征在于，使用6×his作为纯化标签并基于此设计ctb的表达阅读框，用于表达ctb蛋白的重组质粒依次由上游限制性内切酶位点、6×his标签、tev酶的酶切位点、表达ctb蛋白的核苷酸序列以及下游限制性内切酶位点组成；质粒骨架选择具有卡那霉素抗性基因的pet28b(+)。

2.根据权利要求1所述的用于表达ctb蛋白的重组质粒，其特征在于，所述上游限制性内切酶位点为ncoi。

3.根据权利要求1所述的用于表达ctb蛋白...

【专利技术属性】
技术研发人员：张薇，崔涵，吴伟，
申请(专利权)人：宝天生物科技上海有限公司，
类型：发明
国别省市：