一种用于表达Annexin V蛋白的重组质粒及Annexin V蛋白的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种用于表达Annexin V蛋白的重组质粒，使用6×His作为纯化标签并基于此设计Annexin V的表达阅读框，用于表达Annexin V蛋白的重组质粒依次由上游限制性内切酶位点、6×His标签、TEV酶的酶切位点、表达Annexin V蛋白的核苷酸序列以及下游限制性内切酶位点组成；质粒骨架选择具有卡那霉素抗性基因的pET28b(+)。该用于表达CTB蛋白的重组质粒，表达量高。本发明专利技术还公开了一种Annexin V蛋白的制备方法，纯化工艺简单、成本低廉，所获最终产品纯度高、活性好。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种用于表达annexin v蛋白的重组质粒及annexin v蛋白的制备方法。

技术介绍

1、annexin v是一种分子量为35-36kd的ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与磷脂酰丝氨酸(ps)高亲和力特异性结合。在细胞凋亡早期，只分布在正常细胞膜脂质双层内侧的磷脂酰丝氨酸(ps)会翻向外侧，annexin v通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。用标记了荧光素的annexin v作为荧光探针搭配pi、7-aad、dapi等核酸染料使用，能够准确区分正常细胞、凋亡早期和凋亡晚期细胞。但是目前annexin v蛋白的制备方法流程复杂，产品纯度低，生产效率低。

2、大肠杆菌表达系统是重组蛋白工业生产中最常用的一种原核表达系统，其具有体系成熟、遗传背景清晰、生产成本低、表达量高、研发和生产周期短以及易于放大等优点。瞬时转染高拷贝的质粒搭配诱导表达的方式能够极大地提高大肠杆菌表达外源蛋白的效率并且有利于外源蛋白的大量积累。

3、iptg(isopropylβ-d-1-thiogalactopyranosid本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于表达Annexin V蛋白的重组质粒，其特征在于，使用6×His作为纯化标签并基于此设计Annexin V的表达阅读框，用于表达Annexin V蛋白的重组质粒依次由上游限制性内切酶位点、6×His标签、TEV酶的酶切位点、表达Annexin V蛋白的核苷酸序列以及下游限制性内切酶位点组成；质粒骨架选择具有卡那霉素抗性基因的pET28b(+)。

2.根据权利要求1所述的用于表达Annexin V蛋白的重组质粒，其特征在于，所述上游限制性内切酶位点为NcoI。

3.根据权利要求1所述的用于表达Annexin V蛋白的重组质粒，其特征在于，所述下游限制性内...

【技术特征摘要】

1.一种用于表达annexin v蛋白的重组质粒，其特征在于，使用6×his作为纯化标签并基于此设计annexin v的表达阅读框，用于表达annexin v蛋白的重组质粒依次由上游限制性内切酶位点、6×his标签、tev酶的酶切位点、表达annexin v蛋白的核苷酸序列以及下游限制性内切酶位点组成；质粒骨架选择具有卡那霉素抗性基因的pet28b(+)。

2.根据权利要求1所述的用于表达annexin v蛋白的重组质粒，其特征在于，所述上游限制性内切酶位点为ncoi。

3.根据权利要求1所述的用于表达annexin v蛋白的重组质粒，其特征在于，所述下游限制性内切酶位点为bamhi。

4.一种annexin v蛋白...

【专利技术属性】
技术研发人员：张薇，崔涵，吴伟，
申请(专利权)人：宝天生物科技上海有限公司，
类型：发明
国别省市：