【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及蛋白质前药构建体，例如蛋白质融合构建体，其包含含有补体3-和妊娠区蛋白质样α-2-巨球蛋白结构域(cpamd)的蛋白(例如，a2m)和一种或多种药物，并且作为蛋白酶可活化的前药。
技术介绍
1、当生物制药药物以初始活性的形式施用于患者时，它可以在患病和健康组织中发挥其生物学效应。健康组织中的药物效应可能对患者健康、生活质量和/或治疗效果有害。使这些副作用最小化的一种策略是将药物衍生成初始无活性并且首先在患病环境中变得有活性的前药形式。
2、蛋白酶是催化其它蛋白质中肽键水解的酶。存在超过600种已知的人蛋白酶，并且大多数在正常情况下被严格调控。然而，在许多疾病中，特异性蛋白酶变得失调并且相对于健康状况具有增加的活性。已经开发了用于生物制药药物的许多蛋白酶活化的前药技术，其中大多数是基于抗体。数种技术使用封闭抗体抗原结合区(互补位)的掩蔽部分，防止其与其在靶抗原上的同源表位结合，从而使其失活。掩蔽部分通过结合了蛋白酶可切割位点的接头连接到抗体。通过蛋白酶切割接头将抗体与掩蔽部分分离，释放互补位并恢复抗体的活性。掩蔽部分可以被设计成特异性结合抗体互补位(例如，使用噬菌体展示来源的肽，如cytomx的probody技术)，或者可以在没有任何特定的相互作用的情况下，在空间上充分地包围互补位以隔离它(例如，使用长的、体积大的肽，如amunix的xpat技术)。另一种方法通过掺入无活性的vh和vl结构域来防止前药中的功能性vh/vl结构域配对，所述无活性的vh和vl结构域通过蛋白酶敏感的接头(例如maverick的c
3、这些多样的前药技术都具有它们的优点和缺点。例如，cytomx的probody最小化了非人和潜在免疫原性序列的使用，但不是模块化的，并且需要鉴定掺入其平台中的每种抗体的亲和的掩蔽部分。amunix的xpat平台不需要特定的掩蔽/抗体相互作用，并且在前药活化之前和之后具有循环半衰期的差异，但是这是通过使用长的非人肽来实现的。因此，需要结合多种技术的关键优点的新的前药技术，并且将构成本领域的有意义的进步。
技术实现思路
1、本专利技术涉及蛋白质前药构建体(例如，蛋白质融合构建体)的提供，其解决了与现有蛋白质前药平台相关的一个或多个上述问题。
2、特别地，本文所述的蛋白质前药构建体(例如，蛋白质融合构建体)能够实现特定的药物递送和可控的活性。这是通过蛋白质前药构建体经历构象变化来实现的，通过该构象变化它能够控制包含在其中的一种或多种药物的活性。在蛋白质前药构建体的天然(未切割)状态下，一种或多种药物不暴露，因此是无活性的。在蛋白质前药构建体的活性(切割)状态下，药物被暴露并能够与其靶标相互作用。
3、构象变化由包含在本专利技术的蛋白质前药构建体中的蛋白酶切割位点的切割触发。包含在蛋白质前药构建体内的切割位点可以被修饰以控制药物在何处暴露。根据切割位点，药物只能在识别该切割位点的蛋白酶存在的位置暴露。当特定的蛋白酶存在并切割切割位点时，蛋白质前药构建体的构象从“天然的”变为“活性的”。因此，本专利技术提供了蛋白质前药构建体(例如，蛋白质融合构建体)，其中活性和特异性可以被控制并且定向到需要用这样的构建体治疗的受试者的特定区域(例如，特定组织)。
4、具体地，本专利技术涉及蛋白质前药构建体，其包含(a)含有补体3-和妊娠区蛋白样α-2-巨球蛋白结构域(cpamd)的蛋白或其片段，和(b)一种或多种药物，其中(i)cpamd蛋白或其片段包含(1)具有至少一个蛋白酶切割位点的诱饵区，和(2)受体结合域(rbd)，(ii)一种或多种药物位于rbd内部或附近，并且(iii)cpamd蛋白或其片段屏蔽一种或多种药物，并且能够在至少一个蛋白酶切割位点的蛋白水解切割时改变构象，使得一种或多种药物可接近。
5、在一些实施方案中，一种或多种药物位于rbd的环1至4中的任何一个的内部或附近。在一些实施方案中，蛋白质前药构建体是融合蛋白。在一些实施方案中，一种或多种药物位于rbd的环1至4中的任一个内部。在一些实施方案中，环是环1。在一些实施方案中，环是环2。在一些实施方案中，环是环3。在一些实施方案中，环是环4。在一些实施方案中，相对于野生型环序列，通过添加、取代或缺失一个或多个氨基酸来修饰环以容纳一种或多种药物。在一些实施方案中，一种或多种药物替换环的一个或多个氨基酸。
6、在一些实施方案中，一种或多种药物位于rbd的环1至4中的任一个的附近。在一些实施方案中，环是环1。在一些实施方案中，环是环2。在一些实施方案中，环是环3。在一些实施方案中，环是环4。在一些实施方案中，蛋白质前药构建体包含第一相互作用结构域，并且一种或多种药物包含第二相互作用结构域，其中第一相互作用结构域和第二相互作用结构域形成将一种或多种药物定位在环附近的复合物。在一些实施方案中，第一相互作用结构域和第二相互作用结构域形成卷曲螺旋结构。在一些实施方案中，第一相互作用结构域是环内的标签或表位序列，并且第二相互作用结构域是能够特异性结合标签或表位序列的受体或抗体的功能性片段。
7、在一些实施方案中，蛋白质前药构建体能够形成多聚体(例如，二聚体或四聚体)。在一些实施方案中，多聚体形成通过cpamd蛋白的lnk区域发生。在一些实施方案中，多聚体是通过两个二硫键桥接的二聚体形成的四聚体。
8、在一些实施方案中，cpamd蛋白是人cpamd蛋白，或其功能变体、片段或同系物，例如哺乳动物cpamd蛋白。在一些实施方案中，cpamd蛋白或其功能性变体、片段或同源物具有与表1中所列的全长cpamd蛋白序列中的任一个至少约70％、至少约80％或至少约90％同一的氨基酸序列。
9、在一些实施方案中，cpamd蛋白或其功能变体、片段或同源物具有与表1中所示的任一个全长cpamd蛋白序列至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％同一或相同的氨基酸序列。
10、在一些实施方案中，cpamd蛋白选自a2m、pzp、卵固蛋白1、卵固蛋白2、cpamd1、cpamd2、cpamd3、cpamd4、cpamd7、cpamd8、cpamd9及其功能同源物。在具体的实施方案中，cpamd蛋白选自a2m、pzp、卵固蛋白1和卵固蛋白2及其功能同源物。
11、在一些实施方案中，cpamd蛋白是人a2m或其功能同系物，例如哺乳动物a2m。在一些实施方案中，人a2m的功能同源物具有与seq id no:1所示的氨基酸序列至少约70％、至少约80％或至少约90％同一的氨基酸序列。
12、在一些实施方案中，人a2m具有与seq id no:1所示的氨基酸序列至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％同一或本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.蛋白质前药构建体，其包含：
2.根据权利要求1所述的蛋白质前药构建体，其中所述一种或多种药物位于所述RBD的环1至4中的任一个的内部或附近。
3.根据权利要求1或2所述的蛋白质前药构建体，其中所述蛋白质前药构建体是融合蛋白。
4.根据权利要求3所述的蛋白质前药构建体，其中所述一种或多种药物位于所述RBD的环1至4中的任一个内部。
5.根据权利要求4所述的蛋白质前药构建体，其中所述环相对于野生型环序列通过添加、取代或缺失一个或多个氨基酸来修饰，以容纳所述一种或多种药物。
6.根据权利要求5所述的蛋白质前药构建体，其中所述一种或多种药物替换所述环的一个或多个氨基酸。
7.根据权利要求2至6任一项所述的蛋白质前药构建体，其中环是环1。
8.根据权利要求2至6任一项所述的蛋白质前药构建体，其中环是环2。
9.根据权利要求2至6任一项所述的蛋白质前药构建体，其中环是环3。
10.根据权利要求2至6任一项所述的蛋白质前药构建体，其中环是环4。
11.根据权利要求2所述的
12.根据权利要求11所述的蛋白质前药构建体，其中环是环1。
13.根据权利要求11所述的蛋白质前药构建体，其中环是环2。
14.根据权利要求11所述的蛋白质前药构建体，其中环是环3。
15.根据权利要求11所述的蛋白质前药构建体，其中环是环4。
16.根据权利要求11至15任一项所述的蛋白质前药构建体，其中所述蛋白质前药构建体包含第一相互作用结构域，并且所述一种或多种药物包含第二相互作用结构域，其中所述第一相互作用结构域和第二相互作用结构域形成将所述一种或多种药物定位在环附近的复合物。
17.根据权利要求16所述的蛋白质前药构建体，其中所述第一相互作用结构域和所述第二相互作用结构域形成卷曲螺旋结构。
18.根据权利要求16所述的蛋白质前药构建体，其中所述第一相互作用结构域是环内的标签或表位序列，并且所述第二相互作用结构域是能够特异性结合标签或表位序列的受体或抗体的功能片段。
19.根据前述权利要求中任一项所述的蛋白质前药构建体，其中所述蛋白质前药构建体能够形成多聚体。
20.根据权利要求19所述的蛋白质前药构建体，其中多聚体形成通过CPAMD蛋白的LNK区域发生。
21.根据权利要求19或20所述的蛋白质前药构建体，其中所述多聚体是通过二硫化物桥接的二聚体形成的四聚体。
22.根据前述权利要求中任一项所述的蛋白质前药构建体，其中所述CPAMD蛋白选自A2M、PZP、卵固蛋白1、卵固蛋白2、CPAMD1、CPAMD2、CPAMD3、CPAMD4、CPAMD7、CPAMD8、CPAMD9及其功能同源物。
23.根据权利要求22所述的蛋白质前药构建体，其中CPAMD蛋白选自A2M、PZP、卵固蛋白1和卵固蛋白2及其功能同源物。
24.根据权利要求22或23所述的蛋白质前药构建体，其中所述CPAMD蛋白是人A2M或其功能同源物，例如，哺乳动物A2M。
25.根据权利要求24所述的蛋白质前药构建体，其中人A2M的功能同源物具有与SEQ IDNO:1所示氨基酸序列至少约80％同一的氨基酸序列。
26.根据权利要求24的蛋白质前药构建体，其中人A2M具有与SEQ ID NO:1所示氨基酸序列至少约95％同一或相同的氨基酸序列。
27.根据权利要求24至26任一项所述的蛋白质前药构建体，其中所述一种或多种药物位于包含人A2M的第1368至第1379、第1392至第1404、第1420至第1426或第1450至第1457位氨基酸的区域内。
28.根据权利要求27所述的蛋白质前药构建体，其中所述一种或多种药物位于人A2M的第1402和第1403位氨基酸之间。
29.根据权利要求27或28所述的蛋白质前药构建体，其中所述一种或多种药物替换人A2M的第1392至第1403、第1393至第1395或第1393至第1402位氨基酸。
30.根据前述权利要求中任一项所述的蛋白质前药构建体，其中所述一种或多种药物选自：抗原靶向部分(例如，单链或单域抗体)、受体配体(例如，细胞因子)、细胞表面受体的细胞外区域、细胞表面配体的细胞外区域和受体激动剂。
31.根据前述权利要求中任一项所述的蛋白质前药构建体，其中所述诱饵区被修饰以被一种或多种蛋白酶选择性切割。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.蛋白质前药构建体，其包含：
2.根据权利要求1所述的蛋白质前药构建体，其中所述一种或多种药物位于所述rbd的环1至4中的任一个的内部或附近。
3.根据权利要求1或2所述的蛋白质前药构建体，其中所述蛋白质前药构建体是融合蛋白。
4.根据权利要求3所述的蛋白质前药构建体，其中所述一种或多种药物位于所述rbd的环1至4中的任一个内部。
5.根据权利要求4所述的蛋白质前药构建体，其中所述环相对于野生型环序列通过添加、取代或缺失一个或多个氨基酸来修饰，以容纳所述一种或多种药物。
6.根据权利要求5所述的蛋白质前药构建体，其中所述一种或多种药物替换所述环的一个或多个氨基酸。
7.根据权利要求2至6任一项所述的蛋白质前药构建体，其中环是环1。
8.根据权利要求2至6任一项所述的蛋白质前药构建体，其中环是环2。
9.根据权利要求2至6任一项所述的蛋白质前药构建体，其中环是环3。
10.根据权利要求2至6任一项所述的蛋白质前药构建体，其中环是环4。
11.根据权利要求2所述的蛋白质前药构建体，其中所述一种或多种药物位于所述rbd的环1至4中的任一个附近。
12.根据权利要求11所述的蛋白质前药构建体，其中环是环1。
13.根据权利要求11所述的蛋白质前药构建体，其中环是环2。
14.根据权利要求11所述的蛋白质前药构建体，其中环是环3。
15.根据权利要求11所述的蛋白质前药构建体，其中环是环4。
16.根据权利要求11至15任一项所述的蛋白质前药构建体，其中所述蛋白质前药构建体包含第一相互作用结构域，并且所述一种或多种药物包含第二相互作用结构域，其中所述第一相互作用结构域和第二相互作用结构域形成将所述一种或多种药物定位在环附近的复合物。
17.根据权利要求16所述的蛋白质前药构建体，其中所述第一相互作用结构域和所述第二相互作用结构域形成卷曲螺旋结构。
18.根据权利要求16所述的蛋白质前药构建体，其中所述第一相互作用结构域是环内的标签或表位序列，并且所述第二相互作用结构域是能够特异性结合标签或表位序列的受体或抗体的功能片段。
19.根据前述权利要求中任一项所述的蛋白质前药构建体，其中所述蛋白质前药构建体能够形成多聚体。
20.根据权利要求19所述的蛋白质前药构建体，其中多聚体形成通过cpamd蛋白的lnk区域发生。
21.根据权利要求19或20所述的蛋白质前药构建体，其中所述多聚体是通过二硫化物桥接的二聚体形成的四聚体。
22.根据前述权利要求中任一项所述的蛋白质前药构建体，其中所述cpamd蛋白选自a2m、pzp、卵固蛋白1、卵固蛋白2、cpamd1、cpamd2、cpamd3、cpamd4、cpamd7、cpamd8、cpamd9及其功能同源物。
23.根据权利要求22所述的蛋白质前药构建体，其中cpamd蛋白选自a2m、pzp、卵固蛋白1和卵固蛋白2及其功能同源物。
24.根据权利要求22或23所述的蛋白质前药构建体，其中所述cpamd蛋白是人a2m或其功能同源物，例如，哺乳动物a2m。
25.根据权利要求24所述的蛋白质前药构建体，其中人a2m的功能同源物具有与seq idno:1所示氨基酸序列至少约80％同一的氨基酸序列。
26.根据权利要求24的蛋白质前药构建体，其中人a2m具有与seq id no:1所示氨基酸序列至少约95％同一或相同的氨基酸序列。
27.根据权利要求24至26任一项所述的蛋白质前药构建体，其中所述一种或多种药物位于包含人a2m的第1368至第1379、第1392至第1404、第1420至第1426或第1450至第1457位氨基酸的区域内。
28.根据权利要求27所述的蛋白质前药构建体，其中所述一种或多种药物位于人a2m的第1402和第1403位氨基酸之间。
29.根据权利要求27或28所述的蛋白质前药构建体，其中所述一种或多种药物替换人a2m的第1392至第1403、第1393至第1395或第1393至第1402位氨基酸。
30.根据前述权利要求中任一项所述的蛋白质前药构建体，其中所述一种或多种药物选自：抗原靶向部分(例如，单链或单域抗体)、受体配体(例如，细胞因子)、细胞表面受体的细胞外区域、细胞表面配体的细胞外区域和受体激动剂。
31.根据前述权利要求中任一项所述的蛋白质前药构建体，其中所述诱饵区被修饰以被一种或多种蛋白酶选择性切割。
32.根据权利要求31所述的蛋白质前药构建体，其中所述一...
【专利技术属性】
技术研发人员：赛恩迪恩·吕克·哈伍德，扬·约翰尼斯·恩希尔德，
申请(专利权)人：奥胡斯大学，
类型：发明
国别省市：
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