一种植物低分子量ＲＮＡ的快速提取方法技术

本发明专利技术公开了一种植物低分子量ＲＮＡ的快速提取方法，在破碎细胞后，基因组ＤＮＡ和大分子量ＲＮＡ分别与蛋白质形成ＤＮＡ－蛋白质复合物和ＲＮＡ－蛋白复合物，这些ＤＮＡ－蛋白复合物和ＲＮＡ－蛋白复合物在酸性、低盐环境中不溶解，可以通过酸酚抽提去除。低分子量ＲＮＡ则留在上清溶液中，可以通过乙醇或异丙醇沉淀回收。该提取方法快速、高效，经过酚抽提后只需一步沉淀就可以回收低分子量ＲＮＡ。该方法提取的低分子量ＲＮＡ纯度高，可用于低分子量ＲＮＡ的克隆和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交检测。本发明专利技术实验过程简单快速，适合各种植物组织的低分子量ＲＮＡ提取。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种从植物中提取低RNA的方法，具体的说涉及一种低分子量RNA的 快速提取方法，适用于绝大多数植物组织的低分子量RNA的提取。
技术介绍
目前，低分子量RNA(low molecular weight RNA， L丽RNA)是指细胞中分子 量较小、碱基数较少的一类RNA分子，主要包括长度为20-24个核苷酸长度的小干涉 RNA(siRNA)、微小RNA(miRNA)、转运RNA(tRNA)和5S RNA等。这些RNA在细胞活动过程中 扮演了非常重要的作用，特别是siRNA和miRNA对于基因表达的调控是目前的研究热点。 低分子量RNA的提取是其研究的一项基础性工作。常规的低分子量RNA提取方法 一般分2步先分离总RNA，再从总RNA中分离出低分子量RNA。主要有两种策略经典策略 是利用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)从总RNA中分离纯化低分子量RNA，该方法分离过程繁 琐复杂，得率低。第二种策略就是在破碎细胞、去除细胞碎片和蛋白质后，用氯化锂、聚乙二 醇(PEG)等沉淀去除大分子量RNA和基因组DNA，再用醇沉淀回收低分子量RNA。但这种方 法也需要经过多次的低温沉淀本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种植物低分子量ＲＮＡ的快速提取方法，其特征在于：提取缓冲液配比为：２％ＰＶＰ、２％ＣＴＡＢ、０．１Ｍ至０．６Ｍ醋酸钠、２５ｍＭ　ＥＤＴＡ、２％的β－ＭＥ，提取缓冲液ｐＨ值范围是４．０－８．０；植物中低分子量ＲＮＡ的提取方法是按如下步骤实现：　　①将提取缓冲液于６５℃预热３０分钟；　　②取植物新鲜的组织样品，于液氮中迅速研磨成粉末；　　③按每１ｍＬ提取缓冲液中０．１ｇ新鲜样品的比例，将磨好的样品粉末迅速转移到提取缓冲液中，于６５℃水浴２０分钟，其间不断震荡；　　④冰上冷却后，加入等体积的配比为２５∶２４∶１的水饱和酚∶氯仿∶异戊醇，混匀，剧烈涡漩１－２分钟，于４℃，２００００ｇ离心５分钟；　　...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：程汉，安泽伟，黄华孙，高静，
申请(专利权)人：中国热带农业科学院橡胶研究所，
类型：发明
国别省市：66[中国|海南]