一种四膜虫通用的高纯度、高质量小核快速分离纯化方法技术

本发明专利技术属于生物技术领域，提供了一种四膜虫通用的高纯度、高质量小核快速分离纯化方法。包括以下步骤：1)细胞培养、处理及收集；2)细胞破碎；3)初提小核；4)深度纯化小核。利用小核在细胞分裂期与大核分离的特点，实现了无人为外力的大小核分离；利用液氮冷冻，进一步辅助大小核分离并提升了实验时间的灵活性；利用匀浆器，实现了稳定且温和的细胞破碎；利用改良的离心方案，实现了较高纯度小核的快速纯化；利用滤膜进一步去除大核，实现了高纯度小核的纯化。本发明专利技术方法适用于各种四膜虫小核的分离纯化，具有通用性强、核损伤小、稳定性高、分离纯度高、实验周期短等诸多优势。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物，具体涉及一种四膜虫通用的高纯度、高质量小核快速分离纯化方法，该方法适用于快速分离纯化出四膜虫的高纯度、高质量小核。

技术介绍

1、真核生物的绝大多数遗传信息都储存在细胞核中，其中包含的基因组序列、表观遗传修饰、染色质三维结构等信息是现代遗传学、进化生物学、细胞生物学以及发育生物学等领域相关研究的核心。获取高质量、同时期/状态的细胞核样品是多种生物学实验成功且具有高可信度的重要前提。

2、四膜虫(tetrahymena)是一种重要的模式生物，其相关研究为生物学发展做出了重要贡献，如端粒和端粒酶的发现(2009年诺贝尔奖)、核酶的发现(1989年诺贝尔奖)等。该物种具有细胞核的二态性，即一个细胞内同时具有负责遗传的生殖核(小核)和保障生命活动的营养核(大核)。通常小核镶嵌在大核的凹陷中，在细胞分裂期与大核分离，开启有丝分裂。这两种核在序列、修饰、高级结构等方面具有明显的差别，为转录调控、dna编辑等研究提供了良好的研究对象。分离纯化大、小核，分别开展各种实验并进行比较具有重要生物学意义。然而，由于大核染色体拷贝数(约为90倍体)本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种四膜虫通用的高纯度、高质量小核快速分离纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种四膜虫通用的高纯度、高质量小核快速分离纯化方法，其特征在于，步骤1)中所述的SPP培养基包括如下质量百分比的成分：1％Proteose peptone,0.1％Yeast extract,0.2％Glucose,0.003％Sequestrene。

3.根据权利要求1所述的一种四膜虫通用的高纯度、高质量小核快速分离纯化方法，其特征在于，步骤1)中在SPP培养基中培养四膜虫细胞后离心收集至(4-5)*106cells/mL，1500r/min离心3分钟收集...

【技术特征摘要】

1.一种四膜虫通用的高纯度、高质量小核快速分离纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种四膜虫通用的高纯度、高质量小核快速分离纯化方法，其特征在于，步骤1)中所述的spp培养基包括如下质量百分比的成分：1％proteose peptone,0.1％yeast extract,0.2％glucose,0.003％sequestrene。

3.根据权利要求1所述的一种四膜虫通用的高纯度、高质量小核快速分离纯化方法，其特征在于，步骤1)中在spp培养基中培养四膜虫细胞后离心收集至(4-5)*106cells/ml，1500r/min离心3分钟收集四膜虫细胞；并重悬于tris缓冲液中，饥饿处理12～24小时。

4.根据权利要求1所述的一种四膜虫通用的高纯度、高质量小核快速分离纯化方法，其特征在于，步骤2)、4)中medium a溶液现配现用，向每9ml medium a预制溶液中添加100μl0.1m pmsf、50μl正辛醇、20μl0.5 m edta和20μlnp-40得到medium a溶液；所述medium a预制溶液包括如下成分：3％sucrose、4％gum arabic、5mm pipes、5mm mgcl2、5mmspermidine和1mm edta，...

【专利技术属性】
技术研发人员：缪炜，闫冠雄，康定邦，马扬，
申请(专利权)人：中国科学院水生生物研究所，
类型：发明
国别省市：