【技术实现步骤摘要】
本申请涉及免疫学领域，具体地，本申请涉及特异性结合claudin18.2的纳米抗体或其抗原结合片段、嵌合抗原受体、宿主细胞、免疫缀合物、药物组合物、试剂盒、以及相关的方法和用途。
技术介绍
1、claudin18.2（cldn18.2）是一种肿瘤特异性抗原，在多种癌症中表达，包括胰腺癌、胃癌、结肠癌等(zhang, d., huang, g., liu, j.,&wei, w. claudin18.2-targetedcancer theranostics. am j nucl med mol imaging. 64–69. (2023).)。在癌症治疗中，针对cldn18.2的靶向药物是一个热门的研究方向。一些靶向药物已经进入临床试验阶段，包括但不限于抗体、car-t、adc，如针对claudin 18.2的adc药物cmg901等。
2、其中胰腺癌是一种常见的胰腺肿瘤，是一种恶性程度很高、诊断和治疗都很困难的消化道恶性肿瘤。约90%的胰腺癌为起源于腺管上皮的导管腺癌。其发病率和死亡率近年来明显上升，5年生存率很低，预后最差的恶性肿瘤之一(zhao, z.,&liu, w. pancreaticcancer: a review of risk factors, diagnosis, and treatment. technol cancerres treat. 1533033820962117. (2020).)。胰腺癌的临床症状隐匿且不典型,早期确诊率不高，手术死亡率较高，而治愈率几乎为零，迫切需
3、细胞治疗是指采用生物工程的方法获取具有特定功能的细胞,并通过体外扩增、特殊培养等处理后，使这些细胞具有增强免疫、杀死病原体和肿瘤细胞等功能,从而达到治疗某种疾病的目的。细胞治疗主要包括免疫细胞治疗和干细胞治疗。免疫细胞治疗一般是指在体外对某些类型的免疫细胞如t细胞、nk细胞等进行针对性处理后再回输人体内，使其表现出杀伤肿瘤细胞、清除病毒等功能(albinger, n., hartmann, j.,&ullrich, e.current status and perspective of car-t and car-nk cell therapy trials ingermany. (2021). 513–527. (2021).)。其中嵌合抗原受体（car）的修饰能够赋予免疫细胞更强大抗肿瘤功能。car结构包括：胞外域、跨膜域和胞内域，其中胞外域来源于抗体，决定识别抗原的特异性及亲和力，是car-t疗法安全有效性的基础。目前使用较为广泛的是基于人或其它种属的单克隆抗体单链可变区(single chain fv，scfv)对靶蛋白的特异性识别。但存在如下缺陷：在scfv与纳米抗体亲和力相当的基础上，scfv相对于纳米抗体而言分子量较大，在分子表达和功能发挥上均存在一定的局限性；scfv由其亲本单克隆抗体衍生而来，在活性和稳定性等方面都可能存在一定的不足。
4、重链抗体（hcab；heavy-chain antibody）是一种在羊驼外周血液中发现的天然缺失轻链的抗体，只包含一个重链可变区（vhh）和两个常规的ch2与ch3区。克隆其可变区，可以得到只有重链可变区组成的单域抗体（sdab），称为纳米抗体（vhh）。vhh的分子量只有15kd，是已知的可结合目标抗原的最小单位(yang, e. y.,&shah, k. nanobodies: nextgeneration of cancer diagnostics and therapeutics. front oncol.1182.(2020).)。纳米抗体的优势主要包括：1.体积小，穿透力更强：纳米抗体由于体积小，可以轻松渗透到人体组织中，包括肿瘤内部，达到传统抗体无法到达的地方；2.热和化学稳定性更强：纳米抗体在高温和极端ph值条件下仍然能保持稳定性，甚至在90℃的温度下仍能发挥作用；3.更强的亲和力：纳米抗体可以识别隐藏表位，具备更强的亲和力；4.避免补体反应：纳米抗体只有一个结构域，没有传统抗体的fc段，可以避免fc段引起的补体反应。5.更低的免疫源性：纳米抗体的免疫源性较低，这使得它们在临床应用中具有更低的免疫反应风险；6.易于生产和改造：纳米抗体可以在微生物系统，如酵母菌中大量表达，并且易于改造和优化。因此，纳米抗体在肿瘤治疗、神经系统疾病治疗、感染性疾病治疗等方面具有广阔的应用前景，逐渐成为新一代生物医药与临床诊断试剂中的新兴力量。
5、为了提供更加安全、有效的疾病疗法，本领域存在对新的抗claudin18.2纳米抗体的需求。
技术实现思路
1、第一方面，本申请提供了一种特异性结合claudin18.2的纳米抗体或其抗原结合片段，其中所述纳米抗体或其抗原结合片段包含cdr1、cdr2和cdr3，
2、所述cdr1的氨基酸序列如seq id no. 7所示，所述cdr2的氨基酸序列如seq idno. 8所示，且所述cdr3的氨基酸序列如seq id no. 9所示。
3、第二方面，本申请提供了一种嵌合抗原受体，其包含本申请第一方面所述的纳米抗体或其抗原结合片段。
4、第三方面，本申请提供了一种核酸，其编码本申请第一方面所述的纳米抗体或其抗原结合片段或者本申请第二方面所述的嵌合抗原受体。
5、第四方面，本申请提供了一种载体，其包含本申请第三方面所述的核酸。
6、第五方面，本申请提供了一种宿主细胞，其包含本申请第三方面所述的核酸或本申请第四方面所述的载体。
7、第六方面，本申请提供了一种免疫缀合物，其包含本申请第一方面所述的纳米抗体或其抗原结合片段或者本申请第二方面所述的嵌合抗原受体，以及与之相连的有效载荷。
8、第七方面，本申请提供了一种药物组合物，其包含本申请第一方面所述的纳米抗体或其抗原结合片段、本申请第二方面所述的嵌合抗原受体、本申请第三方面所述的核酸、本申请第四方面所述的载体、本申请第五方面所述的宿主细胞或本申请第六方面所述的免疫缀合物，以及药学上可接受的载体。
9、第八方面，本申请提供了本申请第一方面所述的纳米抗体或其抗原结合片段、本申请第二方面所述的嵌合抗原受体、本申请第三方面所述的核酸、本申请第四方面所述的载体、本申请第五方面所述的宿主细胞、本申请第六方面所述的免疫缀合物或本申请第七方面所述的药物组合物在制备用于治疗与claudin18.2表达异常相关疾病的药物中的用途。
10、第九方面，本申请提供了一种用于治疗与claudin18.2表达异常相关疾病的方法，所述方法包括向有此需要的受试者施用治疗有效量的本申请第一方面所述的纳米抗体或其抗原结合片段、本申请第二方面所述的嵌合抗原受体、本申请第三方面所述的核酸、本申请第四方面所述的载体、本申请第五方面所述的宿主细胞、本申请第六方面所述的免疫缀合物或本申请第七方面所述的药物组合物。...
【技术保护点】
1.一种特异性结合Claudin18.2的纳米抗体或其抗原结合片段，其中所述纳米抗体或其抗原结合片段包含CDR1、CDR2和CDR3，其中
2.根据权利要求1所述的纳米抗体或其抗原结合片段，所述纳米抗体或其抗原结合片段包含SEQ ID NOs. 1-6之任一所示的氨基酸序列或者与SEQ ID NOs. 1-6之任一所示的氨基酸序列具有至少80%的序列同一性的氨基酸序列。
3.一种嵌合抗原受体，其包含权利要求1或2所述的纳米抗体或其抗原结合片段。
4.一种核酸，其能够编码权利要求1或2中任一项所述的纳米抗体或其抗原结合片段或者权利要求3所述的嵌合抗原受体。
5.根据权利要求4所述的核酸，其包含SEQ ID NOs. 10-15之任一所示的核苷酸序列或者与SEQ ID NOs. 10-15之任一所示的核苷酸序列具有至少80%的序列同一性的核苷酸序列。
6.一种载体，其包含权利要求4或5所述的核酸。
7.一种宿主细胞，其包含权利要求4或5所述的核酸或权利要求6所述的载体。
8.一种免疫缀合物，其包含权利
9.一种药物组合物，其包含权利要求1或2所述的纳米抗体或其抗原结合片段、权利要求3所述的嵌合抗原受体、权利要求4或5所述的核酸、权利要求6所述的载体、权利要求7所述的宿主细胞或权利要求8所述的免疫缀合物，以及药学上可接受的载体。
10.权利要求1或2所述的纳米抗体或其抗原结合片段、权利要求3所述的嵌合抗原受体、权利要求4或5所述的核酸、权利要求6所述的载体、权利要求7所述的宿主细胞、权利要求8所述的免疫缀合物或者权利要求9所述的药物组合物在制备用于治疗与Claudin18.2表达异常相关疾病的药物中的用途。
11.一种试剂盒，所述试剂盒包含权利要求1或2所述的纳米抗体或其抗原结合片段、权利要求3所述的嵌合抗原受体、权利要求4或5所述的核酸、权利要求6所述的载体、权利要求7所述的宿主细胞、权利要求8所述的免疫缀合物或者权利要求9所述的药物组合物。
12.权利要求1或2所述的纳米抗体或其抗原结合片段、权利要求3所述的嵌合抗原受体、权利要求4或5所述的核酸、权利要求6所述的载体、权利要求7所述的宿主细胞、权利要求8所述的免疫缀合物或者权利要求9所述的药物组合物在制备用于检测或诊断与Claudin18.2表达异常相关疾病的试剂中的用途。
13.一种非诊断目的的检测样品中Claudin18.2蛋白表达水平的方法，所述方法包括：使所述样品与权利要求1或2所述的纳米抗体或其抗原结合片段接触，并检测所述纳米抗体或其抗原结合片段与Claudin18.2蛋白的结合。
...【技术特征摘要】
1.一种特异性结合claudin18.2的纳米抗体或其抗原结合片段，其中所述纳米抗体或其抗原结合片段包含cdr1、cdr2和cdr3，其中
2.根据权利要求1所述的纳米抗体或其抗原结合片段，所述纳米抗体或其抗原结合片段包含seq id nos. 1-6之任一所示的氨基酸序列或者与seq id nos. 1-6之任一所示的氨基酸序列具有至少80%的序列同一性的氨基酸序列。
3.一种嵌合抗原受体，其包含权利要求1或2所述的纳米抗体或其抗原结合片段。
4.一种核酸，其能够编码权利要求1或2中任一项所述的纳米抗体或其抗原结合片段或者权利要求3所述的嵌合抗原受体。
5.根据权利要求4所述的核酸，其包含seq id nos. 10-15之任一所示的核苷酸序列或者与seq id nos. 10-15之任一所示的核苷酸序列具有至少80%的序列同一性的核苷酸序列。
6.一种载体，其包含权利要求4或5所述的核酸。
7.一种宿主细胞，其包含权利要求4或5所述的核酸或权利要求6所述的载体。
8.一种免疫缀合物，其包含权利要求1或2所述的纳米抗体或其抗原结合片段或者权利要求3所述的嵌合抗原受体，以及与之相连的有效载荷。
9.一种药物组合物，其包含权利要求1或2所述的纳米抗体或其抗原结合片段、权利要求3所述的嵌合抗原受体、权...
【专利技术属性】
技术研发人员：冯云峰，朱学锴，时刚强，
申请(专利权)人：晟临生物医药上海有限公司，
类型：发明
国别省市：
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