【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药领域，尤其涉及一种微生物检验中血培养阳性标本直接制备用于药敏实验的菌液的方法。
技术介绍
1、血流感染(blood stream infections,bsi)，是指细菌、真菌等病原体入侵血流所致的一种全身感染性疾病。入血的致病菌以每20分钟一代的惊人速度繁殖生长，快速扩散，可在数小时内激发机体强烈反应，迅速发展为感染性休克、弥散性血管内凝血(dic)和多器官衰竭，死亡率达25-46％，抢救每推迟1小时，病人的死亡率就增高5％，因此缩短确定入血菌种及抗生素敏感性所需要的时间将大大提高抢救成功率。
2、血培养是检测血流感染最简单、最准确和最常用的一种方法，是确认机体血流感染的病原学基础。尽早做血培养检测和早期正确抗菌治疗是控制血流感染应首要采取的措施。此外，血培养作为诊断血流感染的金标准，可准确分离感染病原体，结合药敏结果可以给出正确精准的治疗方案。
3、但是传统方法在血培养阳性报警后，需要将阳性的血培养标本转移到血平板上培养18-24h，等待形成单菌落，然后对纯菌落进行药敏实验，整个过程需要2-3天的时间，病人病情的发展往往无法等待这样漫长的时间。
4、因此，迫切需要开发一种血培养阳性标本直接进行药敏实验的方法，以缩短时间。
技术实现思路
1、本专利技术提供了血培养阳性标本直接制备用于药敏实验的菌液的方法，以至少解决现有技术中制备用于药敏实验的菌液的时间过长的技术问题。
2、本专利技术提供了血培养阳性标本直接制备
3、可选的，对上述第一上清液中的上述目标菌进行计数，是指检测上述目标菌的数量。
4、可选的，上述分离胶将血液分离成血浆和血细胞。
5、可选的，上述分离胶在离心作用下将上述目标菌保留在上述第一上清液中。
6、可选的，采用库尔特计数法对所述目标菌进行计数。
7、可选的，上述目标浓度菌液的第二浓度为104至106个/毫升(cfu/ml)，上述目标浓度菌液直接进行药敏实验。
8、可选的，吸取上述血培养阳性标本2至8毫升至上述离心管中，对包含上述血培养阳性标本的上述待离心液体进行离心，上述离心的转述为1000至6000转/分(r/min)，上述离心的时间为6至14分钟，使上述血培养阳性标本的上述目标菌留在上述待离心液体进行离心后的上清液中，形成上述第一上清液，对包括上述目标菌的上述第一上清液稀释25-100倍，得到上述目标浓度菌液。
9、可选的，吸取上述血培养阳性标本3至6毫升至上述离心管中，对包含上述血培养阳性标本的上述待离心液体进行离心，上述离心的转述为2000至4000转/分，上述离心的时间为8至12分钟，使上述血培养阳性标本的目标菌留在上述待离心液体进行离心后的上清液中，形成上述第一上清液，对包括上述目标菌的上述第一上清液稀释40至60倍，得到上述目标浓度菌液。
10、可选的，上述血培养阳性标本的目标菌留在上述待离心液体进行离心后的上清液中，形成上述第一上清液，上述血培养阳性标本的其他杂质沉到上述离心管的下端。
11、可选的，将上述目标浓度菌液移入药敏分析仪的试剂盒中，进行药敏实验。
12、本专利技术提供的血培养阳性标本直接制备用于药敏实验的菌液的方法，通过离心直接从血培养阳性标本中获得目标菌，节省了平板培养的时间。
13、本专利技术提供了一种血培养阳性标本直接进行药敏实验的菌液制备的方法，为临床治疗方案的制定提供参考。
14、该方法主要步骤如下：
15、抽取5毫升血液于血培养瓶中，并接种50cfu/ml的atcc25922大肠埃希菌放入市售的血培养设备中培养；血培养样本报阳后，吸取体积为a的阳性标本加入含有分离胶的离心管中，离心使血培养阳性标本中的目标菌留在上清液中，其他杂质沉到离心管下端；将上清稀释b倍后移入全自动快速药敏分析仪配套的平板中，上机计数目标菌；然后将目标菌稀释后进行续快速药敏实验，血培养阳性标本直接制备目标浓度菌液后进行药敏实验的流程示意图如图1所示。
16、所以，本专利技术方法可以应用到几乎所有药敏实验，因为其他杂质沉到离心管下端，目标浓度菌液中不含其他杂质，更有利于对目标菌的计数以及浊度的判定。
17、在优选例中吸取的血培养阳性样本体积a为2-8毫升，次优的是3毫升，最优的是4毫升。在另一优选例中离心转速为1000-6000转，次优的是4000转，最优的是3000转。在另一优选例中离心时间为6-14分钟，次优的是12分钟，最优的是10分钟。在另一优选例中离心后上清稀释倍数b为25-100倍，次优的60倍，最优的是50倍。
18、分离胶管是一种用于血清分离的试剂，它能够将血液分离成血清和血细胞。分离胶的作用是通过一种特殊的胶体，将血清和血细胞分离开来。这不仅可以减少血清和血细胞之间的交叉感染，提高实验准确性，而且能够快速的将菌体从血清中快速进行计数与药敏试验。分离胶的特点是能够将血液分离成血清和血细胞，而且不将致病菌与血细胞混合，能够将致病菌留在血清中，以便后续直接进行计数与药敏试验，这种分离胶的主要成分是聚烯烃、聚酯和丙烯。
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1.血培养阳性标本直接制备用于药敏实验的菌液的方法，其特征在于，吸取所述血培养阳性标本至离心管中，所述离心管内含有分离胶，所述血培养阳性标本与所述分离胶混合为待离心液体，对所述血培养阳性标本的所述待离心液体进行离心，使所述血培养阳性标本的目标菌留在所述待离心液体进行离心后的上清液中，形成第一上清液，对所述第一上清液中的所述目标菌进行计数，得到所述第一上清液的第一细菌个数，根据所述第一细菌个数推断得到所述第一上清液的第一浓度，根据所述第一浓度稀释所述第一上清液，得到目标浓度菌液，所述目标浓度菌液直接进行药敏实验。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，对所述第一上清液中的所述目标菌进行计数，是指检测所述目标菌的数量。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述分离胶将血液分离成血浆和血细胞。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述分离胶在离心作用下将所述目标菌保留在所述第一上清液中。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，采用库尔特计数法对所述目标菌进行计数。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，吸取所述血培养阳性标本2至8毫升至所述离心管中，对包含所述血培养阳性标本的所述待离心液体进行离心，所述离心的转述为1000至6000转/分(r/min)，所述离心的时间为6至14分钟，使所述血培养阳性标本的所述目标菌留在所述待离心液体进行离心后的上清液中，形成所述第一上清液，对包括所述目标菌的所述第一上清液稀释25-100倍，得到所述目标浓度菌液。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，吸取所述血培养阳性标本3至6毫升至所述离心管中，对包含所述血培养阳性标本的所述待离心液体进行离心，所述离心的转述为2000至4000转/分，所述离心的时间为8至12分钟，使所述血培养阳性标本的目标菌留在所述待离心液体进行离心后的上清液中，形成所述第一上清液，对包括所述目标菌的所述第一上清液稀释40至60倍，得到所述目标浓度菌液。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述血培养阳性标本的目标菌留在所述待离心液体进行离心后的上清液中，形成所述第一上清液，所述血培养阳性标本的其他杂质沉到所述离心管的下端。
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，将所述目标浓度菌液移入药敏分析仪的试剂盒中，进行药敏实验。
...【技术特征摘要】
1.血培养阳性标本直接制备用于药敏实验的菌液的方法，其特征在于，吸取所述血培养阳性标本至离心管中，所述离心管内含有分离胶，所述血培养阳性标本与所述分离胶混合为待离心液体，对所述血培养阳性标本的所述待离心液体进行离心，使所述血培养阳性标本的目标菌留在所述待离心液体进行离心后的上清液中，形成第一上清液，对所述第一上清液中的所述目标菌进行计数，得到所述第一上清液的第一细菌个数，根据所述第一细菌个数推断得到所述第一上清液的第一浓度，根据所述第一浓度稀释所述第一上清液，得到目标浓度菌液，所述目标浓度菌液直接进行药敏实验。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，对所述第一上清液中的所述目标菌进行计数，是指检测所述目标菌的数量。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述分离胶将血液分离成血浆和血细胞。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述分离胶在离心作用下将所述目标菌保留在所述第一上清液中。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，采用库尔特计数法对所述目标菌进行计数。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述目标浓度菌液的第二浓度为104至106个/毫升(cfu/ml)，所述目标浓度菌液直接进行药敏实验。<...
【专利技术属性】
技术研发人员：唐明忠，
申请(专利权)人：北京威妙生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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