【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基因编辑领域，具体而言，涉及一种核酸修饰酶、包含其的基因编辑系统(碱基编辑器)及其应用。
技术介绍
1、如何精准、高效地对基因组进行修饰是生命科学领域研究的重要目标，传统的大范围核酸酶(meganuclease)、锌指融合蛋白或talen需要针对特定标的dna序列难以实现精准的碱基编辑，例如crispr/cas9技术通过在靶点处产生dna双链断裂(dsb)诱发细胞内的同源重组(hr)和非同源末端连接(nhej)修复，但dsb所诱发的dna修复难以实现高效而稳定的单碱基突变。
2、通过将脱氨酶蛋白与核酸酶的融合得到的单碱基编辑工具能够实现对单碱基的特异性突变，更加多样性的碱基编辑工具的开发对于科学研究、疾病治疗、育种等有重要的意义。
技术实现思路
1、本专利技术的一个目的在于提供一种核酸修饰酶。
2、本专利技术的另一目的在于提供包含所述核酸修饰酶的融合蛋白。
3、本专利技术的另一目的在于提供编码核酸修饰酶或融合蛋白的核酸分子。
4、本专利技术的另一目的在于提供包含编码核酸修饰酶或融合蛋白的核酸分子的组合物。
5、本专利技术的另一目的在于提供包括编码核酸修饰酶或融合蛋白的核酸分子的载体。
6、本专利技术的另一目的在于提供一种递送系统。
7、本专利技术的另一目的在于提供一种基因编辑系统(碱基编辑器)。
8、本专利技术的另一目的在于提供包括编码核酸修饰酶或融合蛋白的核酸分子的宿主细
9、本专利技术的另一目的在于提供所述核酸修饰酶的应用。
10、本专利技术的另一目的在于提供包含所述核酸修饰酶的融合蛋白的应用。
11、一方面，本专利技术提供了一种核酸修饰酶，其包括与seq id no:1具有至少60％，65％，70％，75％，80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％，99.5％，99.9％或100％序列同一性的氨基酸序列。
12、根据本专利技术的一些具体实施方案，本专利技术的核酸修饰酶起到脱氨作用。
13、另一方面，本专利技术还提供了一种融合蛋白，其包括与seq id no:1具有至少60％，65％，70％，75％，80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％，99.5％，99.9％或100％序列同一性的核酸修饰酶。
14、根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术的融合蛋白，其还包含核酸可编程核苷酸结合蛋白(napdnabp)。
15、根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术的融合蛋白，其中所述核酸可编程核苷酸结合蛋白为归巢核酸内切酶(meganuclease)、锌指融合蛋白(zfn)或talen。
16、根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术的融合蛋白，其中所述核酸可编程核苷酸结合蛋白为rna引导的核酸可编程核苷酸结合蛋白。
17、根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术的融合蛋白，其中所述rna引导的核酸可编程核苷酸结合蛋白为rna引导的核酸酶。
18、根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术的融合蛋白，其中所述核酸酶选自ii型crispr-cas多肽、ⅰ型crispr-cas多肽、ⅲ型crispr-cas多肽、ⅳ型crispr-cas多肽、ⅴ型crispr-cas多肽、ⅵ型crispr-cas多肽、ⅶ型crispr-cas多肽、iscb多肽、tnpb多肽、isrb多肽中的至少一种。
19、根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术的融合蛋白，其中所述的核酸酶包括cas9、casx、casy、cas12a(cpf1)、cas12b(c2cl)、cas13a(c2c2)、cas12c(c2c3)、casl2g、cas12h、cas12i、cas13b、cas13c、cas13d、cas14、csn2、argonaute(ago)、或具有与seq id no:10-14、16中任一具有至少60％，65％，70％，75％，80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％，99.5％，99.9％或100％序列同一性的氨基酸序列。
20、根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术的融合蛋白，其中所述核酸酶为核酸酶切口酶。
21、根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术的融合蛋白，其中所述核酸修饰酶连接至核酸可编程核苷酸结合蛋白的n端、c端，或核酸酶的n端和c端之间。
22、另一方面，本专利技术还提供了一种核酸分子，其包括编码本专利技术所述核酸修饰酶的多核苷酸，或编码本专利技术所述的融合蛋白的多核苷酸。
23、根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术的核酸分子，其包含与seq id no:2或4具有至少60％，65％，70％，75％，80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％，99.5％，99.9％或100％序列同一性的核苷酸序列。
24、另一方面，本专利技术还提供了一种载体，所述载体包含本专利技术所述的核酸分子。
25、根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术的载体，其中所述核酸分子可操作地连接至启动子。
26、根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术的载体，其中所述启动子选自组成型启动子、诱导性启动子、泛素启动子、细胞类型特异性启动子和组织特异性启动子中的一种或多种。
27、根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术的载体，其中所述载体选自一种或多种腺相关病毒载体、一种或多种逆转录病毒载体、一种或多种慢病毒载体、一种或多种噬菌体载体、一种或多种腺病毒载体、一种或多种疱疹病毒载体、或者一种或多种质粒载体。
28、根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术的载体，其中所述核酸分子可操作地连接至一终止子。
29、另一方面，本专利技术还提供了一种递送系统，其包含：
30、递送介质；和
31、本专利技术所述的融合蛋白、所述的核酸分子或所述的载体。
32、根据本专利技术的具体实施方案，本专利技术的递送系统，其中所述递送介质是纳米颗粒、脂质体、外泌体、微囊泡、电转设备或基因枪。
33、另一方面，本专利技术还提供了一种crispr-cas系统，该系统包括：
34、(1)包括rna引导的核酸酶及本专利技术所述的核酸修饰酶构成的融合蛋白或编码该融合蛋白的核苷酸序列；及
35、(2)能够与靶dna序列杂交的一或多个引导rna(grna)或编码该一或多个引导rna的一或多个核苷酸序列；
36、其中所述一或多个引导rna能够与所述融合蛋白形成复合物，以便将融合蛋白引导至本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种核酸修饰酶，其包括与SEQ ID NO:1具有至少60％，65％，70％，75％，80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％，99.5％，99.9％或100％序列同一性的氨基酸序列。
2.一种融合蛋白，其包括与SEQ ID NO:1具有至少60％，65％，70％，75％，80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％，99.5％，99.9％或100％序列同一性的核酸修饰酶；
3.一种核酸分子，其包括编码如权利要求1所述核酸修饰酶的多核苷酸，或编码如权利要求2所述的融合蛋白的多核苷酸；
4.一种载体，所述载体包含权利要求3所述的核酸分子；
5.一种递送系统，其包含：
6.一种CRISPR-Cas系统，该系统包括：
7.一种CRISPR-Cas载体系统，其包括一个或多个载体，所述一
8.一种组合物，其包括：
9.一种细胞，其包含权利要求2所述的融合蛋白、权利要求3所述的核酸分子、权利要求4所述的载体、权利要求5所述的递送系统、权利要求6所述的系统、权利要求7所述的载体系统或权利要求8所述的组合物；
10.一种医药组合物，其包括药学上可接受的赋形剂；及权利要求1所述的核酸修饰酶，或权利要求2所述的融合蛋白，或权利要求3所述的核酸分子、或权利要求4所述的载体、或权利要求5所述的递送系统、或权利要求6所述的系统、或权利要求7所述的载体系统、或权利要求8所述的组合物、或权利要求9所述的细胞。
11.一种用于修饰靶DNA序列的方法，该方法包括使权利要求5所述的递送系统、权利要求6所述的系统、权利要求7所述的载体系统、或权利要求8所述的组合物与靶DNA接触；
12.一种修饰细胞的方法，该方法包括将以下组分引入待修饰细胞内：
13.权利要求2所述的融合蛋白、权利要求3所述的核酸分子、权利要求4所述的载体、权利要求5所述的递送系统、权利要求6所述的系统、权利要求7所述的载体系统、权利要求8所述的组合物、权利要求9所述的细胞或权利要求10所述的医药组合物在治疗疾病或制备用于治疗疾病的药物中的用途；
...【技术特征摘要】
1.一种核酸修饰酶，其包括与seq id no:1具有至少60％，65％，70％，75％，80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％，99.5％，99.9％或100％序列同一性的氨基酸序列。
2.一种融合蛋白，其包括与seq id no:1具有至少60％，65％，70％，75％，80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％，99.5％，99.9％或100％序列同一性的核酸修饰酶；
3.一种核酸分子，其包括编码如权利要求1所述核酸修饰酶的多核苷酸，或编码如权利要求2所述的融合蛋白的多核苷酸；
4.一种载体，所述载体包含权利要求3所述的核酸分子；
5.一种递送系统，其包含：
6.一种crispr-cas系统，该系统包括：
7.一种crispr-cas载体系统，其包括一个或多个载体，所述一个或多个载体包含：
8.一种组合物，其包括：<...
【专利技术属性】
技术研发人员：张红玲，
申请(专利权)人：尧唐上海生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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