一种间充质干细胞的冻存及复苏方法技术

本发明专利技术公开了一种间充质干细胞的冻存及复苏方法，包括以下步骤：（1）取待冻存的间充质干细胞重悬于添加冻存保护剂的培养基中，培养15‑20 h后进行程序降温，完成后保存于液氮中；（2）将液氮中保存的细胞取出，在37‑40℃水浴融化，然后离心去除细胞悬液，加入添加复苏保护剂的培养基，离心后再次用添加复苏保护剂的培养基重悬，培养20‑24 h后完成细胞复苏。本发明专利技术提供的间充质干细胞的冻存及复苏方法提高了细胞成活率和增殖活性，同时维持细胞干性和多向分化潜能，为临床干细胞治疗提供性能和状态较好的种子细胞。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及干细胞领域，尤其涉及一种间充质干细胞的冻存及复苏方法。

技术介绍

1、间充质干细胞(mesenchymal stem cell，msc)是干细胞的一种，广泛分布在骨髓、骨膜、脂肪、滑膜、骨骼肌、乳牙、脐带、脐带血中。具有干细胞的共性，即自我更新、多向分化和归巢的能力。具有亚全能分化潜能，在特定条件下可以分化为成骨细胞、成软骨细胞、脂肪细胞、神经细胞、肌细胞等。人们最早从骨髓中分离得到mscs，后来发现肝脏、皮肤、肌肉、软骨、外周血等多种组织中也有少量mscs存在。mscs具有强大的增殖能力，较强的分化能力，低免疫原性和免疫调节功能，具有支持造血、调节免疫功能、促进损伤组织修复等作用，已成为再生医学和组织工程学领域的重要种子细胞与潜在治疗工具。

2、细胞冻存是保存细胞的重要手段，可以使细胞在一定时期内脱离生长状态而将其细胞特性保存起来，在需要的时候进行复苏用于实验研究或临床应用。因此，细胞冻存及复苏的方法对于维持冻存细胞活性，降低细胞损伤至关重要。但现有的间充质干细胞的冻存方法存在很多不足，如含有高比例的胎牛血清，会对细胞的分化形成本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种间充质干细胞的冻存及复苏方法，其特征在于，包括以下步骤：

2. 根据权利要求1所述间充质干细胞的冻存及复苏方法，其特征在于，所述培养基为DMEM/F12培养基，所述冻存保护剂在培养基中的浓度为：枇杷叶提取物2.5-5.0 μg/mL、银耳多糖10-20 ng/mL、白藜芦醇1-5 μM；所述复苏保护剂在培养基中的浓度为：马钱苷15-25ng/mL、羧甲基纤维素钠10-20 μg/mL、表皮生长因子25-35 ng/mL。

3.根据权利要求1所述间充质干细胞的冻存及复苏方法，其特征在于，步骤（1）中间充质干细胞在培养基中的密度为1×107-5×107个/mL...

【技术特征摘要】

1.一种间充质干细胞的冻存及复苏方法，其特征在于，包括以下步骤：

2. 根据权利要求1所述间充质干细胞的冻存及复苏方法，其特征在于，所述培养基为dmem/f12培养基，所述冻存保护剂在培养基中的浓度为：枇杷叶提取物2.5-5.0 μg/ml、银耳多糖10-20 ng/ml、白藜芦醇1-5 μm；所述复苏保护剂在培养基中的浓度为：马钱苷15-25ng/ml、羧甲基纤维素钠10-20 μg/ml、表皮生长因子25-35 ng/ml。

3.根据权利要求1所述间充质干细胞的冻存及复苏方法，其特征在于，步骤（1）中间充质干细胞在培养基中的密度为1×107-5×107个/ml。

4.根据权利要求1所述间充质干细胞的冻存及复苏方法，其特征在于，步骤（2）中间充质干细胞在培养基中的密度为1×104-5×104个/ml。

5. 根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：苗秋菊，过凯，吴帅，
申请(专利权)人：清泽医疗科技广东有限公司，
类型：发明
国别省市：