【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及用于特异性并且简便地测定乙型肝炎病毒(hbv)的糖链修饰表面抗原蛋白的试剂盒。
技术介绍
1、全世界约20亿人的已感染者、约3亿人的慢性感染患者所存在的乙型肝炎病毒(hbv)是可引起慢性肝炎、肝硬化、肝癌、占肝癌的原因的20～30％、每年有88万人死亡的感染症(非专利文献1～5)。虽然存在针对hbv的疫苗，但每年仍有约3000万人新感染，450万人在持续进行针对慢性肝炎的治疗(非专利文献1、2)。虽然hbv治疗的目标无可怀疑地是生命预后和qol的改善，但临床上的具体治疗目标是血液中定量hb表面抗原蛋白(qhbsag：quantitative hepatitis b surface antigen)的消失(非专利文献6～8)。然而，即使通过目前的使用干扰素制剂、核酸类似物制剂的治疗，也几乎无法实现乙型肝炎病毒表面抗原蛋白(hbsag：hepatitis b surface antigen)的消失，新型治疗的开发重新变得极为活跃(非专利文献6～8)。
2、hbsag的包膜蛋白由s蛋白(s-hbs蛋白，s＝small)、m蛋白(m-hbs蛋白，m＝middle)、l蛋白(l-hbs蛋白，l＝large)构成。现有的hbsag检测用诊断药由于可识别出全部的hbv粒子所具有的s蛋白(s-hbs)，因此作为hbv感染的存在确认的广泛指标而成为在日常诊疗中不可缺少的检查药。
3、自古以来已知hbv与其他病毒同样地也缠绕着糖链，但通过近年的ms(质谱分析)解析，其糖链结构才变得清楚(非专利文献9、10)。s
4、另一方面，临床上的n型糖链修饰的最大问题点是与逃避人等病毒宿主的免疫相关的点(非专利文献14)。考虑其机制在于，由于hbv在侵入宿主细胞后，在缠绕宿主来源的糖链后被释放到血液中，因此被宿主的免疫细胞认作是“自体”的糖链而避免了免疫系统的排除。另外，还考虑如下机制：由于n型糖链的分枝(糖链的branch)伸展，遮盖了病毒的抗原识别部位而变得不被免疫系统识别。此外，病毒本身通过突变也使糖链附加位置发生变化。例如，熟知的有第130位氨基酸的甘氨酸(g130)被替换为天冬酰胺(g130n)而异位性地附加糖链。
5、现有的hbv疫苗(bimmugen，heptavax)是使用“没有糖链修饰”的s-hbs作为免疫源而制造的。在现有疫苗接种患者血清中，能够产生针对s-hbs的抗体，但该抗体所识别的表位虽与没有糖链修饰的s-hbs部分结合，但也显示出不识别糖链修饰部分(非专利文献15)。这样的针对s-hbs的抗体在实验中虽然也显示出中和通常的hbv，但也显示出无法中和糖链突变株(非专利文献16)。如此，由于s-hbs的糖链修饰的不同，治疗效果会大幅变化，这在临床上是个大问题。
6、在现有的hbsag检测用试剂中使用的是“没有糖链修饰”的s-hbs。因此，还考虑有如下情况：使糖链突变了的病毒在现有的检查中不会被检测到而成为阴性(作为“隐匿性感染”而实际地存在)，并且无法准确地掌握发生因糖链修饰机制导致的免疫逃避的病例，导致不充分的治疗。糖链修饰s-hbs检测用的试剂目前还尚未建立。
7、附加于s-hbs的糖链的解析本身可以通过ms进行，事实上通过ms已经弄清楚了其结构。但是，临床上实际上处理大量的患者血清需要耗费过多的时间和成本，并不实用。此外，由于患者血清中存在饮食来源的庞大的糖链、各种脏器代谢来源的糖链，因此即使网罗性地掌握了糖链，也难以在技术上确定hbv来源的糖链。
8、现有技术文献
9、非专利文献
10、1)who.guidelines for the prevention,care and treatment of personswith chronic hepatitis b infection.march 2015.
11、2)who.guidelines on hepatitis b and c testing.february 2017.
12、3)terrault na,loch asf,mcmahon bj et al.update on prevention,diagnosis,and treatment of chronic hepatitis b:aasld 2018hepatitisbguidance.hepatol 67:1560,2018.
13、4)european association foe the study of the liver.easl 2017clinicalpractice guideline on the management of hepatitis b virus infection.jhepatol67:370,2017.
14、5)日本肝臓学会肝炎診療ガイドライン作成委員会。b型肝炎治療ガイドライン(第3.1版)。2019年3月。
15、6)lok as,zoulim f,dusheiko g et al.hepatitis b cure:from discovery toregulatory approval.j hepatol 66:1296,2017.
16、7)revill pa,chisari fv,block jm et al.a global scientific strategy tocure hepatitis b.lancet gastroenterol hepatol.4:545,2019.
17、8)cornberg m,lok as.terrault na et al.guidance for design andendpoints of clinical trials in chronic hepatitis b–report from the 2019easl-aasld hbv treatment endpoints conference.j hepatol 72:539,2020.
18、9)schmitt s et al.structure of pre-s2 n-and o-linked glycans insurface proteins from different genotypes of hepatitis b virus.journal ofgeneral virology(2004),85,2045–2053.
19、10)wagatsuma t,kuno a,angata k et al.highly sensitive glycanprofiling of hepa本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种检测乙型肝炎病毒(HBV)的方法，其包含使试样与和表面抗原蛋白结合的抗体及凝集素接触的工序。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其中，乙型肝炎病毒的表面抗原蛋白为S蛋白。
3.根据权利要求1或2所述的检测方法，其中，凝集素为小麦胚芽凝集素。
4.根据权利要求1～3中任一项所述的检测方法，其包含利用ELISA法进行测定的工序。
5.根据权利要求1～4中任一项所述的检测方法，其用于规划乙型肝炎病毒的检查、预防或治疗。
6.根据权利要求1～5中任一项所述的检测方法，其用于筛选用于乙型肝炎病毒的检查、预防或治疗的药物。
7.根据权利要求1～6中任一项所述的检测方法，其进一步包含计算经糖链修饰的表面抗原蛋白/表面抗原蛋白的工序。
8.根据权利要求1～7中任一项所述的检测方法，其中，试样来源于正在接受或接受过核酸类似物制剂治疗的患者。
9.根据权利要求1～8中任一项所述的检测方法，其中，试样来源于确认有血中HBV-DNA的抑制的患者。
10.一种用于检测乙型肝炎病毒的糖链修饰表
11.一种乙型肝炎的治疗或预防方法，其包含权利要求1～9中任一项所述的方法。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种检测乙型肝炎病毒(hbv)的方法，其包含使试样与和表面抗原蛋白结合的抗体及凝集素接触的工序。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其中，乙型肝炎病毒的表面抗原蛋白为s蛋白。
3.根据权利要求1或2所述的检测方法，其中，凝集素为小麦胚芽凝集素。
4.根据权利要求1～3中任一项所述的检测方法，其包含利用elisa法进行测定的工序。
5.根据权利要求1～4中任一项所述的检测方法，其用于规划乙型肝炎病毒的检查、预防或治疗。
6.根据权利要求1～5中任一项所述的检测方法，其用于筛选用于乙型肝炎病毒的检查、预防或治疗的药物。...
【专利技术属性】
技术研发人员：成松久，安形清彦，米山博之，
申请(专利权)人：株式会社RCMG，
类型：发明
国别省市：
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