动脉粥样硬化斑块样本单细胞核悬液的制备方法及应用技术

本发明专利技术公开一种动脉粥样硬化斑块样本单细胞核悬液的制备方法及应用。用于制备动脉粥样硬化斑块样本单细胞核悬液的消化体系包括CA‑630、匀浆缓冲液；所述匀浆缓冲液包括Tris缓冲液、无机盐、糖、二硫苏糖醇(DTT)，酶抑制剂。CA‑630和匀浆缓冲液配置的消化体系对斑块组织样本进行消化解离处理，再经匀浆缓冲液和细胞核重悬液进行梯度离心以去除钙化碎片等杂质，从而得分离度高的高质量单细胞核悬液。本发明专利技术的单细胞核悬液得率高、纯度好、细胞类型丰富，充分还原病理及生理状态下的细胞类型及比例，为鲜离体的、以及已冻存的样本组织提供如单细胞测序、流式分析等多种研究的基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物检测，尤其涉及一种动脉粥样硬化斑块样本单细胞核悬液的制备方法及应用。

技术介绍

1、动脉粥样硬化是一种影响血管健康的常见疾病，其特征是在血管壁内形成斑块，主要由胆固醇、钙和其他物质组成。在当前医学研究中，对动脉粥样硬化斑块的深入理解对于预防和治疗心血管疾病至关重要。

2、传统上，研究者们主要关注整体组织水平的分析，这种方法限制了对单个细胞层面的深入研究。然而由于斑块样本坏死区域广泛、杂质多、样本活性差，存在钙化区域和脂质坏死核心，对于分离单个活细胞存在较大难度并且得率低，单细胞测序的结果也容易出现因分离造成的偏倚。

3、cn111549019a公开了一种显著提升单细胞悬液质量的动脉斑块消化的方法，但因为动脉粥样硬化斑块样本坏死广泛，该方法所得活细胞较少且细胞类型不全面，因此并不适合应用于单细胞测序等下游分析。

4、cn113293196a虽然公开了一种适用于冷冻组织的单细胞核提取方法，然而其分离液组分较简单，只考虑到对rna的保护作用，限制了所得单细胞核悬液在其他单细胞多组学研究中的应用，并且其差速离心本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于制备动脉粥样硬化斑块样本单细胞核悬液的消化体系，其特征在于，所述消化体系包括CA-630、匀浆缓冲液；

2.根据权利要求1所述的消化体系，其特征在于，所述消化体系中、CA-630的体积浓度为0.2％-0.3％；余量为匀浆缓冲液。

3.根据权利要求1所述的消化体系，其特征在于，所述无机盐包括氯化钠、氯化钾、氯化镁、氯化钙中的至少一种。

4.根据权利要求3所述的消化体系，其特征在于，所述酶抑制剂包括RNA酶抑制剂、蛋白酶抑制剂、磷酸酶抑制剂、组蛋白去乙酰化酶抑制剂中的至少一种；

5.根据权利要求4所述的消化体系，其特征在于，消化体系...

【技术特征摘要】

1.一种用于制备动脉粥样硬化斑块样本单细胞核悬液的消化体系，其特征在于，所述消化体系包括ca-630、匀浆缓冲液；

2.根据权利要求1所述的消化体系，其特征在于，所述消化体系中、ca-630的体积浓度为0.2％-0.3％；余量为匀浆缓冲液。

3.根据权利要求1所述的消化体系，其特征在于，所述无机盐包括氯化钠、氯化钾、氯化镁、氯化钙中的至少一种。

4.根据权利要求3所述的消化体系，其特征在于，所述酶抑制剂包括rna酶抑制剂、蛋白酶抑制剂、磷酸酶抑制剂、组蛋白去乙酰化酶抑制剂中的至少一种；

5.根据权利要求4所述的消化体系，其特征在于，消化体系中，tris缓冲液的浓度为15-20mm，nacl的浓度为15-20mm，kcl的浓度为60-80mm，mgcl2的浓度为5-10mm，cac...

【专利技术属性】
技术研发人员：王慧，何牮，周献超，
申请(专利权)人：上海交通大学医学院，
类型：发明
国别省市：