一种基于线粒体基因组DNA探针捕获高通量测序的细胞种属污染鉴定方法技术

技术编号:42617193 阅读:29 留言:0更新日期:2024-09-03 18:23
本发明专利技术涉及生物技术领域,特别涉及一种基于线粒体基因组DNA探针捕获高通量测序的细胞种属污染鉴定方法。本发明专利技术提供了评估人线粒体探针应用于细胞种属污染鉴定的可行性的方法、细胞种属污染鉴定方法、ATP6和/或COX1在鉴定细胞种属污染中的应用,主要基于线粒体序列在不同种属间的保守性,利用人线粒体探针捕获未知物种的线粒体序列,根据不同物种线粒体基因组的覆盖度进行物种鉴定,这种方法理论上可以对大部分物种进行鉴定,提升了种属间物种鉴定效率。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物,特别涉及一种基于线粒体基因组dna探针捕获高通量测序的细胞种属污染鉴定方法。


技术介绍

1、确保用于生产用(重组蛋白、疫苗等生物制品生产)细胞基质、治疗性细胞产品,在体外培养过程中无不同种属间细胞交叉污染,是细胞质量控制中的重要内容之一,近年来国内干细胞及组织工程细胞在基础研究及临床应用研究中快速发展,进一步强调了对细胞间交叉污染检测的重要性。目前《中国药典》2010年版对于细胞种属鉴定及排除细胞间交叉污染的方法,主要是采用染色体分析、str图谱和同工酶图谱分析法。这些方法主要的缺点是耗时、成本高,或是细胞用量大,以及可检定的种属范围窄。其中除str图谱检测外,所有其他方法灵敏度都很低,而成熟的str方法只适合对人源细胞的检测。

2、多种基于蛋白和dna的方法可以用于动物物种鉴定,这些方法在实用性和所具有优势方面存在差异,也各有局限。国标gb/t 40172-2021《哺乳动物细胞交叉污染检测方法通用指南》文件中对常用检测方法的原理、依据、局限和结果判读有原则性的描述。

3、

4、线粒体dna(mtd本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.鉴定细胞种属污染的方法,所述细胞种属污染为特定物种的细胞的交叉污染,所述特定物种的细胞包括Vero、CHO和/或Sf9,其特征在于,基于人线粒体探针捕获待测培养物的核酸片段进行测序分析获得细胞种属污染鉴定结果。

2.如权利要求1所述的方法,其特征在于,包括如下步骤:

3.如权利要求2所述的方法,其特征在于,所述覆盖度为87%以上的判为存在所述特定物种的细胞;所述覆盖度为6%以下的判为不存在所述特定物种的细胞。

4.如权利要求1至3任一项所述的方法,其特征在于,所述特定物种的线粒体的核苷酸序列与人线粒体的核苷酸序列的一致性为69%~80%。

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【技术特征摘要】

1.鉴定细胞种属污染的方法,所述细胞种属污染为特定物种的细胞的交叉污染,所述特定物种的细胞包括vero、cho和/或sf9,其特征在于,基于人线粒体探针捕获待测培养物的核酸片段进行测序分析获得细胞种属污染鉴定结果。

2.如权利要求1所述的方法,其特征在于,包括如下步骤:

3.如权利要求2所述的方法,其特征在于,所述覆盖度为87%以上的判为存在所述特定物种的细胞;所述覆盖度为6%以下的判为不存在所述特定物种的细胞。

4.如权利要求1至3任一项所述的方法,其特征在于,所述特定物种的线粒体的核苷酸序列与人线粒体的核苷酸序列的一致性为69%~80...

【专利技术属性】
技术研发人员:刘青山刘静王佳左宁
申请(专利权)人:赛福解码北京基因科技有限公司
类型:发明
国别省市:

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