【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及胡萝卜素制备，尤其涉及一种具有高抗氧化性的胡萝卜素制备方法。
技术介绍
1、胡萝卜素为主要的维生素a源物质，主要有α、β、γ三种形式，其中最为重要的为β-胡萝卜素。胡萝卜素是一种橘黄色的脂溶性化合物，它是自然界中最普遍存在也是最稳定的天然色素。胡萝卜素被广泛应用于食品工业、饲料工业、医药及化妆品工业上，用于得到胡萝卜素的方法有天然物萃取法、化学合成法及微生物发酵法等；
2、胡萝卜素的抗氧化性主要表现为它具有清除自由基的能力。胡萝卜素分子中含有多个双键，在光、热、氧气及活泼性较强的自由基离子的存在下，易被氧化，从而保护机体不被破坏。生物体中存在大量的脂质过氧化和自由基反应，从而导致细胞功能的下降，机体的衰老以及疾病的发生，胡萝卜素的存在可减少脂质过氧化；
3、胡萝卜素分子中共轭双键的数目越多，颜色越红，抗氧化性越强。除了共轭体系的长度，胡萝卜素抗氧化性还和取代基的种类、位置以及数量等有关。不同种类光合细菌合成的类胡萝卜素组成和结构有差异，抗氧化性强弱也不一样，而胡萝卜素的抗氧化性越高，其利用率越高，因此在现有技术中，如何生产高抗氧化性的胡萝卜素成为一项技术难题；
4、针对上述的技术缺陷，现提出一种解决方案。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于：通过深红红螺菌发酵培育胡萝卜素，经过对其所含的胡萝卜素种类进行分析可知其在适应的光强环境中培育其抗氧化性好的组分含量大，基于预设的高抗氧化性的胡萝卜素的抗氧化活性指标的前提下，探定最适光强数
2、为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：一种具有高抗氧化性的胡萝卜素制备方法，包括以下操作步骤：
3、步骤一、菌种活化：挑取深红红螺菌菌rps单菌落于20ml灭菌基础培养基中，在35℃环境中厌氧光照下培养，至菌液浓度od660为1.4-1.6，在转速为12000r/min、4℃下冷冻离心10-15min去上清液，得到菌泥作为光合细菌菌种；
4、步骤二、发酵培养；以有机酸作为灭菌培养基的碳源，采用光照厌氧体系培养，往装有60ml灭菌培养基的具塞透明玻璃瓶接入光合细菌菌泥，使培养起始浓度od660为0.3-0.5，继续在35℃环境中厌氧光照下恒温培养；
5、步骤三、每隔24h采样得到样品，检测样品中光合细菌生长量和胡萝卜素含量qi，直至达到生长稳定期，进而确定培养周期；
6、其中光合细菌生长量通过光合细菌菌体浓度进行反馈，所述光合细菌菌体浓度采用光密度法检测，具体的将菌液适当稀释，测波长660nm处的吸光值，所述样品中的胡萝卜素含量qi经过分光光度计法检测获取；
7、所述步骤二中，在进行厌氧光照下恒温培养时，通过白炽灯提供光源，控制单元获取样品，检测样品中的胡萝卜素实际含量qi和抗氧化活性ki，并与预设的胡萝卜素抗氧化活性指数进行比较以确定培养过程中的最适光强，在控制单元将白炽灯调整至最适光强后，控制单元控制更换碳源，在基于不同的碳源培养环境下，生成胡萝卜素生长效率模型，进而确定最适碳源种类；
8、进一步的，所述深红红螺菌菌保藏于中国普通微生物菌种保藏中心，保藏编号为cgmccno∶1.5005。
9、进一步的，按照质量组分计，所述灭菌培养基包含以下组分：碳源10-60g/l，乙酸钠3-4g/l，氯化铵1-1.5g/l，磷酸氢二钾1-1.5g/l，七水硫酸镁0.5-0.8g/l，无水氯化钙0.02-0.05g/l，柠檬酸铁铵0.01-0.02g/l，酵母粉0.5-0.8g/l，复合维生素b0.01-0.02g/l，ph为6.8-7.2，上述组分混合后得到的灭菌培养基在115℃下高压蒸汽灭菌30min。
10、进一步的，样品中胡萝卜素实际含量测定的具体方法如下：
11、s101、提取1ml菌液，将菌液在12000r/min下冷冻离心10min得菌泥；
12、s102、加入去离子水重悬再离心，重复两次，得到干净的菌体沉淀物，往沉淀物内加入2ml丙酮∶甲醇(7∶2)溶液并超声浸提1h；
13、s103、提取液12000r/min离心10min，取上清稀释，测波长为n1处的吸光值，代入以下公式计算菌液中的胡萝卜素含量qi:其中an1为提取液在吸光系数为n1下的吸光值，v1为提取液体积，n为提取液的稀释倍数，v2为初始样本体积。
14、进一步的，测定样品中胡萝卜素的抗氧化活性的具体方式如下：
15、s201、取2ml样品分别和2mldpph溶液以及2ml无水乙醇混合，避光反应30min测波长为n2处的吸光值分别计为a2和a1；
16、s202、将2mldpph溶液和2ml无水乙醇混合，避光反应30min测波长为n2处的吸光值吸光值计为a0；
17、s203、根据以下公式计算抗氧化活性ki：其中e为去百分比系数，抗氧化活性的大小是反应dpph自由基清除率数值的大小，dpph自由基清除率越高，则抗氧化活性越强。
18、进一步的，确定样品达到生长稳定期的具体过程如下：
19、s301、将恒温培养初始时刻记为t0，每隔ti时长进行采样得到样品，检测样品中的胡萝卜素实际含量qi；
20、s302、获取预设的生长稳定期内的样品中的胡萝卜素含量ql，计算(t0+nti)时刻的含量偏差值△q:△q＝|ql-qi|；
21、s303、获取预设的含量偏差阈值△qmin，若△q大于△qmin，则继续培养ti时长，重新获取样品；
22、若△q小于或者等于△qmin，则样品培养周期为(t0+nti)。
23、进一步的，在进行厌氧光照下恒温培养时，所述控制单元获取生长稳定期内的胡萝卜素实际含量qi，将胡萝卜素实际含量qi和预设的胡萝卜素含量ql进行比较以确定最适光强，控制单元确定白炽灯的光强为ci，设定i＝1，2，3,4,5；
24、所述控制单元储存有预设的胡萝卜素含量ql数据和标准光照环境数据；
25、所述预设的胡萝卜素含量ql包括第一预设胡萝卜素含量q1、第二预设胡萝卜素含量q2、第三预设胡萝卜素含量q3和第四预设胡萝卜素含量q4，其中q1＜q2＜q3＜q4；
26、所述标准光照环境数据包括第一预设光强c1、第二预设光强c2、第三预设光强c3、第四预设光强c4和第五预设光强c5，其中c1＜c2＜c3＜c4＜c5；
27、若qi＜q1，所述控制单元判定最适光强为第一预设光强c1；
28、若q1＜qi＜q2，所述控制单元判定最适光强为第二预设光强c2；
29、若q2＜qi＜q3，所述控制单元判定最适光强为第三预设光强c3；
30、若q3＜qi＜q4，所述控制单元判定最适光强本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种具有高抗氧化性的胡萝卜素制备方法，其特征在于，包括以下操作步骤：
2.根据权利要求1所述的具有高抗氧化性的胡萝卜素制备方法，其特征在于，所述深红红螺菌菌保藏于中国普通微生物菌种保藏中心，保藏编号为CGMCCNO∶1.5005。
3.根据权利要求1所述的具有高抗氧化性的胡萝卜素制备方法，其特征在于，按照质量组分计，所述灭菌培养基包含以下组分：碳源10-60g/L，乙酸钠3-4g/L，氯化铵1-1.5g/L，磷酸氢二钾1-1.5g/L，七水硫酸镁0.5-0.8g/L，无水氯化钙0.02-0.05g/L，柠檬酸铁铵0.01-0.02g/L，酵母粉0.5-0.8g/L，复合维生素B0.01-0.02g/L，pH为6.8-7.2，上述组分混合后得到的灭菌培养基在115℃下高压蒸汽灭菌30min。
4.根据权利要求1所述的具有高抗氧化性的胡萝卜素制备方法，其特征在于，样品中胡萝卜素实际含量测定的具体方法如下：
5.根据权利要求1所述的具有高抗氧化性的胡萝卜素制备方法，其特征在于，测定样品中胡萝卜素的抗氧化活性的具体方式如下：
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