一种适用于细胞爬片的HEK-293细胞株及其构建方法和应用技术

本发明专利技术专利涉及细胞工程领域，具体涉及一种适用于细胞爬片的HEK‑293细胞株及其构建方法和应用。其构建方法包括：将整合素基因通过基因转染的方式整合至HEK‑293细胞株中得适用于细胞爬片的HEK‑293细胞株，整合素基因为以下基因中一种或多种基因组合：编码整合素α5的基因、编码整合素β3的基因、编码整合素β5的基因。该构建方法构建得到的HEK‑293细胞株具有优异的粘附能力，其贴壁率可以达到90％以上。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术专利涉及细胞工程领域，具体涉及一种适用于细胞爬片的hek-293细胞株及其构建方法和应用。

技术介绍

1、细胞爬片是将厚度约为0.17mm、玻璃材质的盖玻片浸泡在细胞培养基中，细胞在玻片上生长，细胞爬片主要应用于高质量的细胞免疫荧光和原位杂交等制作。此外，在测试细胞免疫荧光和原位杂交实验时，玻璃爬片可接受多种化学试剂的暴露处理，应用范围较塑料爬片广泛。人胚肾293(hek-293)细胞由于具有较高的生长特性和转染效率，是外源基因表达和药物功能研究常用的细胞系，是细胞爬片经常使用的细胞之一。但是，专利技术人发现，hek-293在盖玻上生长速度慢、贴壁效果差，造成细胞脱片，影响细胞爬片的制作及后期应用。

2、细胞的爬片效果取决于细胞与玻片的粘附能力，决定细胞粘附能力的关键因子是整合素(integrin)及其受体的结合。整合素由一个alpha(α)和一个beta(β)亚基组成异二聚体，目前已知共发现18个α亚基变体和8个β亚基变体，产生24个异二聚体。目前研究显示α5、β3和β5的表达对细胞粘附至关重要，但这些亚基在hek-293的表达水平本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种适用于细胞爬片的HEK-293细胞株的构建方法，其特征在于，包括：将整合素基因通过基因转染的方式整合至HEK-293细胞株中得适用于细胞爬片的HEK-293细胞株，整合素基因为以下基因中一种或多种基因组合：编码整合素α5的基因、编码整合素β3的基因、编码整合素β5的基因。

2.根据权利要求1所述的适用于细胞爬片的HEK-293细胞株的构建方法，其特征在于，整合素基因为以下基因中的一种：编码整合素α5的基因、编码整合素α5的基因和编码整合素β3的基因组合、编码整合素α5的基因和编码整合素β5的基因组合。

3.根据权利要求1或2所述的适用于细胞爬片的HEK-2...

【技术特征摘要】

1.一种适用于细胞爬片的hek-293细胞株的构建方法，其特征在于，包括：将整合素基因通过基因转染的方式整合至hek-293细胞株中得适用于细胞爬片的hek-293细胞株，整合素基因为以下基因中一种或多种基因组合：编码整合素α5的基因、编码整合素β3的基因、编码整合素β5的基因。

2.根据权利要求1所述的适用于细胞爬片的hek-293细胞株的构建方法，其特征在于，整合素基因为以下基因中的一种：编码整合素α5的基因、编码整合素α5的基因和编码整合素β3的基因组合、编码整合素α5的基因和编码整合素β5的基因组合。

3.根据权利要求1或2所述的适用于细胞爬片的hek-293细胞株的构建方法，其特征在于，包括：将整合素基因通过基因转染的方式整合至初级hek-293细胞株中得适用于细胞爬片的hek-293细胞株。

4.根据权利要求3所述的适用于细胞爬片的hek-293细胞株的构建方法，其特征在于，包括：(1)使用胰酶将hek-293细胞株进行消化传代，然后使用高糖dmem，10％血清和青链霉素培养；(2)将整合素基因克隆至表达载体上得重组过表达载体；(3)用限制性内切酶pvu i将重组过表达载体的氨苄抗性位点酶切，使重组过表达载体线性化得线性化重组过表达载体；(4)线性化重组过表达载体转染至hek-293细胞株中；(5)转染后，使用含新霉素...

【专利技术属性】
技术研发人员：金立方，陈萍，傅国权，
申请(专利权)人：绍兴金易生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：