【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医学的，尤其涉及一种多因子扩增冻存脐带血nk细胞的方法，以及多因子扩增冻存脐带血nk细胞的装置。
技术介绍
1、nk细胞又称自然杀伤细胞，是一类能非特异性杀伤肿瘤细胞和病毒感染细胞的淋巴细胞，主要分布于骨髓、外周血、肝、脾、肺和淋巴结，约占血液中所有免疫细胞(白细胞数量)的15％，属于天然免疫系统的核心细胞。nk细胞不需要接受免疫系统的特殊指令，也不需要其他细胞的配合，自己单独就能识别并清除病原微生物，是一种兼具免疫监视、免疫应答、免疫记忆三大功能于一身的“全能型”免疫细胞。
2、各种不同来源nk生成体系有着各自不同的特点：1.外周血来源nk细胞相对较容易获得，经过多年研究发展，目前从外周血高效扩增可以获得大量高纯度nk细胞体系已经成熟，但相对较低的转染效率可能会限制了它们的使用。2.hipsc来源nk解决了es细胞面临的伦理问题，目前从ipsc体外生成nk细胞技术体系已经建立，且易于基因编辑，但较低的扩增能力限制了该技术方法在临床上的转化应用；3.从脐血mnc获得高纯度nk细胞体系也已经建立，ucb-nk...
【技术保护点】
1.一种多因子扩增冻存脐带血NK细胞的方法，其特征在于：其包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的多因子扩增冻存脐带血NK细胞的方法，其特征在于：该方法还包括脐带血血浆分离：将脐带血转移到离心管中，吸取少量血样进行菌检；室温下对离心管中的血样进行离心3000rpm/min，10min；离心结束后，用移液管将上层血浆转移到新的无菌离心管中，封口膜封住管盖，56℃、30min水浴锅中进行灭活；灭活结束后，转移到4℃冰箱，30min，从冰箱中取出血浆，离心3000rpm、10min，取上清备用。
3.根据权利要求2所述的多因子扩增冻存脐带血NK细胞的...
【技术特征摘要】
1.一种多因子扩增冻存脐带血nk细胞的方法，其特征在于：其包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的多因子扩增冻存脐带血nk细胞的方法，其特征在于：该方法还包括脐带血血浆分离：将脐带血转移到离心管中，吸取少量血样进行菌检；室温下对离心管中的血样进行离心3000rpm/min，10min；离心结束后，用移液管将上层血浆转移到新的无菌离心管中，封口膜封住管盖，56℃、30min水浴锅中进行灭活；灭活结束后，转移到4℃冰箱，30min，从冰箱中取出血浆，离心3000rpm、10min，取上清备用。
3.根据权利要求2所述的多因子扩增冻存脐带血nk细胞的方法，其特征在于：该方法还包括脐带血单个核细胞的获取和冻存；获取：将离心后的血细胞沉淀用等体积的生理盐水重悬混匀，将混匀的血细胞延离心管壁缓慢加入到含有淋巴细胞分离液的离心管中，确保分层清晰；配平放入离心机中，室温下离心，2000rpm、20min；离心结束后，吸取中间的白膜层脐带血单个核细胞，吸尽两液面交界处的细胞层，将脐带血单个核细胞层放入新的离心管中，用生理盐水重悬混匀定容至50ml；细胞悬液室温下离心处理1500rpm、5min；离心结束后，弃上清，加生理盐水再次清洗细胞，沉淀两遍；离心后的细胞沉淀用手弹散，用生理盐水混匀，混匀过程中吸取少量计数；冻存：将获取步骤中清洗沉淀后的细胞置于冻存管中，并添加无动物源血清细胞冻存液，调整细胞浓度至5-10×10 6/ml，将悬浮的细胞平均分装到冻存管内，每支冻存管分装约为1ml；将冻存管盖子拧紧，标注后经程序降温盒转入-80℃超低温冰箱中，24-72小时后转移至液氮罐中长期保存。
4.根据权利要求3所述的多因子扩增冻存脐带血nk细胞的方法，其特征在于：步骤(1)中使用的培养瓶经cd16+il-15抗体包被预处理。
5.根据权利要求4所述的多因子扩增冻存脐带血nk细胞的方法，其特征在于：培养瓶的cd16抗体包被预处理：用移液管...
【专利技术属性】
技术研发人员：于杰，梁萍，蔡倩，梁文涛，李鑫，董雪娟，窦健萍，张东云，高校朋，周美珍，
申请(专利权)人：中国人民解放军总医院第五医学中心，
类型：发明
国别省市：
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