一种针对微量卵母细胞或早期胚胎细胞改良版的ATAC技术制造技术

本发明专利技术公开了一种针对微量卵母细胞或早期胚胎细胞改良版的ATAC技术。本技术针对微量细胞进行实验开发。生殖细胞起始量在50‑100个，体细胞的数目在500‑1k左右。本发明专利技术改良版的ATAC的技术通过简化实验流程，改变孵育条件，利用Tn5酶建库的方法使该技术更加适用于生殖细胞以及微量细胞。改良版的ATAC的结果显示，针对卵母细胞和早期胚胎细胞整体的基因比对率达到80％‑95％，线粒体片段比对率降低至20％‑30％，TSS(转录起始位点)位置中有明显的富集，数据质量有了很大的提升，整体数据质量可以满足分析需求。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分子生物领域，涉及一种针对微量卵母细胞或早期胚胎细胞改良版的atac技术。

技术介绍

1、理解生物学过程中细胞状态的变化是至关重要的，无论是在发育、分化还是疾病中。这些变化通常受基因表达的调控，并且近年来的研究表明，这种调控主要由转录因子(tf)的活性所决定。tf与染色质的结合不仅可解释染色质的表观遗传状态，还可以改变染色质的结构和动态。染色质可以存在于多种状态，这些状态由不同的表观遗传修饰组合定义，并且与特定的基因调控模式相关。在细胞状态的改变过程中，这些表观遗传状态会发生变化，从而影响基因的表达。了解染色质在特定生物学背景下的表观遗传状态可以揭示观察到的基因表达模式背后的分子机制。

2、染色质分为常染色质和异染色质。在结构上常染色质折叠压缩程度低，处于伸展状态。dna复制、基因转录都发生在dna的致密高级结构变为松散的状态；这部分打开的染色质，就叫开放染色质(open chromatin)。而打开的染色质，就有足够的区域允许一些调控蛋白(比如转录因子和辅因子)过来与之相结合。而染色质的这种特性，就叫做染色质的可及性(chrom本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种改良的ATAC-seq方法，其特征在于，包含以下步骤：

2.根据权利要求1所述的改良的ATAC-seq方法，其特征在于，所述的步骤(1)细胞处理直接针对卵母细胞或早期胚胎细胞进行操作。

3.根据权利要求2所述的改良的ATAC-seq方法，其特征在于，使用台氏液处理卵母细胞或早期胚胎细胞的透明带，用0.2％PBS-PVP对台式液处理后的细胞进行三次清洗，将清洗后的细胞转移至2X Lysis Buffer A，放置在冰上裂解10～12min，优选10min。

4.根据权利要求2或3所述的改良的ATAC-seq方法，其特征在于所述的裂解液2X lys...

【技术特征摘要】

1.一种改良的atac-seq方法，其特征在于，包含以下步骤：

2.根据权利要求1所述的改良的atac-seq方法，其特征在于，所述的步骤(1)细胞处理直接针对卵母细胞或早期胚胎细胞进行操作。

3.根据权利要求2所述的改良的atac-seq方法，其特征在于，使用台氏液处理卵母细胞或早期胚胎细胞的透明带，用0.2％pbs-pvp对台式液处理后的细胞进行三次清洗，将清洗后的细胞转移至2x lysis buffer a，放置在冰上裂解10～12min，优选10min。

4.根据权利要求2或3所述的改良的atac-seq方法，其特征在于所述的裂解液2x lysisbuffer a配方为：ph＝7.5的tris-hcl 20mm，nacl 20mm，mgcl26mm；配制方法如下表：

5.根据权利要求1或2所述的改良的atac-seq方法，其特征在于，步骤(2)...

【专利技术属性】
技术研发人员：王曦，闫环宇，何行思，曾潇，史巧珍，陈诺，盛伟，张瀚文，
申请(专利权)人：南京医科大学，
类型：发明
国别省市：