一种检测昆虫细胞系中弹状病毒的荧光定量PCR引物探针组及方法技术

本发明专利技术公开一种检测昆虫细胞系中弹状病毒的荧光定量PCR引物探针组及方法，本发明专利技术提供一段用于检测弹状病毒的靶点，靶点具有SEQ ID NO.1所示序列或特异性片段，并开发基于此的检测昆虫细胞系中弹状病毒的荧光定量PCR检测方法。本发明专利技术所述的检测靶点特异性强，能精准的检出昆虫细胞系Sf9中弹状病毒污染，而不受昆虫细胞基因组等干扰。检测灵敏度高，最低能检出5copie/μL的靶基因，结果与二代测序一致，不漏检。检测方便快捷，较普通PCR方法工作量少，较测序方法成本低。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物，涉及一种检测昆虫细胞系中弹状病毒的荧光定量pcr引物探针组及方法。背景信息昆虫杆状病毒表达载体系统(baculovirus expression vector system，bevs)是由smith于1983年构建的真核细胞表达系统，该系统能对表达的重组蛋白进行多种翻译后修饰，如二硫键形成、磷酸化、酰化、糖基化、寡聚化和折叠等。其构建简单，易于放大，效率高，既可表达单一的抗原蛋白，也可表达复合蛋白，并可在细胞内形成具有良好抗原性的病毒样颗粒，现已被广泛用于外源蛋白表达、药物筛选、疫苗开发、基因治疗等领域。bevs因其安全性高、操作简便、可用于多亚基蛋白同时表达、适用于大规模培养等优势，具有极大的发展前景。分离自鳞翅类昆虫草地贪夜蛾(spodoptera frugiperda)卵巢上皮细胞的sf-9是杆状病毒表达系统中常用的昆虫细胞基质，该细胞株是由g.e.smith和c.l.cherry从iplb-sf-21-ae克隆而来，细胞形态更加均一，对核型多角体病毒敏感，适用于分泌蛋白的表达。2014年，几乎同一时间由3个不同团队在不同的sf细胞系中独立发现了弹状病毒本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一段用于检测弹状病毒的靶点，所述靶点具有SEQ ID NO.1所示序列或特异性片段。

2.一种检测Sf-RV的荧光定量PCR引物探针组，其特征在于，包括一对特异性引物和一个TaqMan探针，所述的特异性引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示，所述的TaqMan探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

3.根据权利要求2所述的检测Sf-RV的荧光定量PCR引物探针组，其特征在于，TaqMan探针的5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团。

4.根据权利要求3所述的检测Sf-RV的荧光定量PCR引物探针组，...

【技术特征摘要】

1.一段用于检测弹状病毒的靶点，所述靶点具有seq id no.1所示序列或特异性片段。

2.一种检测sf-rv的荧光定量pcr引物探针组，其特征在于，包括一对特异性引物和一个taqman探针，所述的特异性引物的核苷酸序列如seq id no.2和seq id no.3所示，所述的taqman探针的核苷酸序列如seq id no.4所示。

3.根据权利要求2所述的检测sf-rv的荧光定量pcr引物探针组，其特征在于，taqman探针的5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团。

4.根据权利要求3所述的检测sf-rv的荧光定量pcr引物探针组，其特征在于，所述的荧光报告基团为fam。

5.根据权利要求3所述的检测sf-rv的荧...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈凯，李丽，高正伦，
申请(专利权)人：北京先声祥瑞生物制品股份有限公司，
类型：发明
国别省市：