【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种可激活的启动子，以及包含所述的可激活的启动子的表达系统、载体、递送系统、反应容器、水性物体和组合物。本专利技术还提供了一种包含水性物体的组件和网络的组合物，该水性物体包含所述的可激活的启动子。此外，本专利技术提供了使用本专利技术的可激活的启动子来表达转录物的方法和表达多肽的方法。本专利技术还提供了一种磷脂混合物，以及包含所述的磷脂混合物的水性物体和组合物。
技术介绍
1、诱导型转录和/或翻译系统在调节广泛的生物分子(从调控rna到蛋白质和肽)的产生中提供显著的多功能性。
2、已经开发出了多种类型的诱导型转录系统用于体内和体外使用。
3、无细胞转录和/或翻译系统已广泛用于合成生物学，以创建能够在最小细胞样环境中表达功能蛋白质的系统(1-3)。这些系统已被用于蛋白质的体外筛选和进化(4-7)、哺乳动物(8)和细菌的细胞(9)的调节。已进行过前期研究，例如通过将无细胞表达系统封装在单个的脂质双层有界隔室(合成细胞)中。
4、光激活转录和/或翻译提供了高度的灵活性和调节。之前就已经实现了这些系统，但是这些系统要么不能在关闭状态下完全抑制转录(12)，要么它们不能容易地被封装在某些类型的合成细胞中(13，14)。
5、因此，对于提供更严格的调控(如在激活和抑制状态之间)的改进的诱导转录和/或翻译系统存在着持续的需求。对于在生物分子的表达中有用的改进系统和结构也存在着持续的需求，特别是在合成生物体系的背景下。
技术实现思路
1、
2、因此，本专利技术提供了一种可激活的启动子，其包含核苷酸启动子序列和与该可激活的启动子的一个或多个组分偶联的一个或多个转录抑制部分，其中当一个或多个转录抑制部分从可激活的启动子上解偶联时，核苷酸启动子序列被配置为激活。
3、在本专利技术的任何可激活的启动子中，可激活的启动子的一个或多个组分可以是核苷酸组分。一个或多个核苷酸组分可以是一个或多个核苷酸碱基或一个或多个核苷酸碱基类似物。一个或多个核苷酸组分可以是一个或多个核苷酸糖基，或多个核苷酸磷酸基。
4、在本专利技术的任何可激活的启动子中，一个或多个转录抑制部分可以通过一个或多个可裂解部分与可激活的启动子的一个或多个组分偶联。一个或多个可裂解部分优选为光可裂解部分。一个或多个光可裂解部分可以是在与电磁辐射接触时可以裂解的部分，可选地，其中电磁辐射为红外(ir)，优选地，其中电磁辐射为紫外(uv)。一个或多个可裂解部分可以是包含2-硝基苄基的光可裂解部分。
5、在本专利技术的任何包含一个或多个可裂解部分的可激活的启动子中，一个或多个可裂解部分还可以包含连接体，并且其中一个或多个转录抑制部分和一个或多个可裂解部分通过该连接体与可激活的启动子的一个或多个组分偶联。
6、连接体可以是二元胺连接体。二元胺连接体可以是选自式─n(h)(ch2)nn(h)─的连接体的烷基-二元胺连接体，其中n为1至20，可选为1至12，优选为1至8。二元胺连接体可以是1,6-二氨基己烷。
7、在优选的实施例中，可激活的启动子的一个或多个组分是一个或多个核苷酸碱基或核苷酸碱基类似物，并且一个或多个可裂解部分还包含如上所述的连接体。
8、一个或多个核苷酸碱基可以是嘌呤碱基。一个或多个核苷酸碱基可以是腺嘌呤和/或鸟嘌呤。在任何此类嘌呤碱基中，连接体可以与嘌呤环键合。连接体可以在8号位与嘌呤环键合。
9、一个或多个核苷酸碱基可以是嘧啶碱基。一个或多个核苷酸碱基可以是胸腺嘧啶和/或胞嘧啶和/或尿嘧啶。在任何此类嘧啶碱基中，连接体可以与嘧啶环键合。连接体可以在5号位与嘧啶环键合。在本专利技术的任何可激活的启动子中，一个或多个转录抑制部分可以包含小分子:蛋白质复合物，并且其中复合物的小分子与本文所述的任何一个或多个可裂解部分偶联。小分子:蛋白质复合物可以是生物素:链霉亲和素复合物，并且其中复合物的生物素部分与本文所述的任何一个或多个可裂解部分偶联。
10、在本专利技术的任何可激活的启动子中，一个或多个转录抑制部分可以与核苷酸启动子序列的一个或多个组分偶联。
11、在一个实施例中，可激活的启动子是包含核苷酸启动子序列和与该可激活的启动子的一个或多个组分偶联的一个或多个转录抑制部分的可激活的启动子，其中当一个或多个转录抑制部分从可激活的启动子上解偶联时，核苷酸启动子序列被配置为激活；其中可激活的启动子的一个或多个组分是一个或多个核苷酸碱基；其中一个或多个转录抑制部分通过包含2-硝基苄基的一个或多个光可裂解部分与可激活的启动子的一个或多个组分偶联；其中一个或多个光可裂解部分还包含连接体，并且其中一个或多个转录抑制部分和一个或多个可裂解部分通过该连接体与可激活的启动子的核苷酸碱基偶联；其中连接体是选自式─n(h)(ch2)nn(h)─的连接体的烷基-二元胺连接体，其中n为1至8，可选地，其中二元胺连接体是1，6-二氨基己烷；其中一个或多个核苷酸碱基为胸腺嘧啶，并且连接体在5号位与嘧啶环键合；并且其中一个或多个转录抑制部分包含生物素:链霉亲和素复合物，并且其中复合物的生物素部分与一个或多个光可裂解部分偶联。
12、本专利技术还提供了一种表达系统，其包含与开放阅读框或与基因可操作地连接的如本文所定义或描述的本专利技术的任何可激活的启动子。开放阅读框或基因可以编码肽、寡肽、多肽或蛋白质。开放阅读框或基因可以编码膜蛋白；例如泵蛋白、通道蛋白、孔蛋白、受体蛋白，转运蛋白，或影响细胞识别或细胞间相互作用的蛋白。膜蛋白可以是α-溶血素(αhl)孔蛋白。开放阅读框或基因可以编码不可翻译的rna，例如sirna或mirna。
13、本专利技术的任何表达系统可以可操作地配置为与噬菌体或噬菌体相关的转录组分一起使用。例如，启动子可以是噬菌体启动子或噬菌体相关的启动子。核苷酸启动子序列可以包含t7启动子。
14、本专利技术的任何表达系统可以可操作地配置为与原核转录组分(例如细菌转录组分)一起使用。
15、本专利技术的任何表达系统可以可操作地配置为与真核转录组分一起使用，可选为昆虫(例如杆状病毒)或哺乳动物转录组分。
16、本专利技术的任何表达系统还可以包含一个或多个附加的转录元件，例如增强子。
17、本专利技术还提供了一种载体，其包含如本文所定义或描述的本专利技术的任何表达系统。
18、载体可以是线性双链dna分子，或者其可以是连续(例如环状的)双链dna分子。
19、载体可以是病毒载体，可选为逆转录病毒载体、慢病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体或单纯疱疹病毒载体。本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种磷脂混合物，其中所述混合物包含含有非PEG化磷脂和PEG化磷脂的磷脂，其中2.5mol％至15mol％的所述磷脂是PEG化磷脂。
2.根据权利要求1所述的混合物，其特征在于，5mol％至15mol％的所述磷脂是PEG化磷脂，可选地，其中7.5mol％至15mol％的所述磷脂是PEG化磷脂，或10mol％至15mol％的所述磷脂是PEG化磷脂。
3.根据权利要求2所述的混合物，其特征在于，10mol％至15mol％的所述磷脂是PEG化磷脂且所述PEG化磷脂包含具有分子量为1500g/mol至5000g/mol的PEG基团，可选地，其中所述PEG化磷脂包含具有分子量为1800g/mol至2200g/mol的PEG基团。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的混合物，其特征在于，所述非PEG化磷脂是甘油磷脂和/或所述PEG化磷脂是甘油磷脂。
5.根据权利要求4所述的混合物，其特征在于，
6.根据权利要求4或5所述的混合物，其特征在于，所述非PEG化磷脂包含DPhPC，和/或所述PEG化磷脂包含DPPE-mPEG2000。
7.根据权利要求6所述的混合物，其特征在于，所述磷脂包含DPhPC和DPPE-mPEG2000，并且其中所述磷脂包含2.5mol％至15mol％的DPPE-mPEG2000，可选为5mol％至15mol％的DPPE-mPEG2000。
8.一种水性物体，包含水性介质，并且还包含在所述水性物体的至少部分表面上的磷脂分子混合物的外层，其中所述磷脂分子混合物是根据权利要求1至7中任一项所述的混合物。
9.根据权利要求8所述的物体，其特征在于，所述磷脂分子的外层封装所述水性物体。
10.根据权利要求7或8所述的物体，其特征在于，所述物体是水性液滴或水凝胶物体。
11.一种组合物，包含根据权利要求8至10中任一项所述的一个或多个水性物体和疏水介质，其中所述一个或多个水性物体设置在所述疏水介质中。
12.根据权利要求11所述的组合物，其特征在于，所述疏水介质包含油。
13.根据权利要求12所述的组合物，其特征在于，所述油包含硅油、碳氢化合物、碳氟化合物或其两种或多种混合物，可选地其中(a)所述疏水介质包含(a)碳氢化合物和硅油的混合物或(b)碳氢化合物:硅油的比例为体积比50:50至20:80，或体积比50:50至80:20，优选比例为体积比50:50至40:60。
14.根据权利要求13中任一项所述的组合物，其特征在于，所述碳氢化合物是C10-C20烷烃，优选地，其中所述碳氢化合物是十六烷。
15.根据权利要求13或14所述的组合物，其特征在于，所述一个或多个水性物体包含形成组件的多个水性物体，可选地其中所述组件中的一个或多个水性物体与所述组件中的至少一个其他水性物体接触。
16.根据权利要求15所述的组合物，其特征在于，在所述接触的反应容器之间形成界面，可选地，其中(a)所述界面包含磷脂分子层，优选为磷脂分子双层或(b)所述界面不包含磷脂分子层。
17.根据权利要求16所述的组合物，其特征在于，所述多个水性物体相连以形成水性物体网络，可选地其中至少两个水性物体通过包含磷脂分子双层的界面相连，并且其中所述至少两个水性物体的水性介质通过所述双层内的孔流体相通，并且进一步可选地，所述孔由α-溶血素(αHL)组成。
18.一种电化学电路，其包含根据权利要求17所述的组合物。
...【技术特征摘要】
1.一种磷脂混合物，其中所述混合物包含含有非peg化磷脂和peg化磷脂的磷脂，其中2.5mol％至15mol％的所述磷脂是peg化磷脂。
2.根据权利要求1所述的混合物，其特征在于，5mol％至15mol％的所述磷脂是peg化磷脂，可选地，其中7.5mol％至15mol％的所述磷脂是peg化磷脂，或10mol％至15mol％的所述磷脂是peg化磷脂。
3.根据权利要求2所述的混合物，其特征在于，10mol％至15mol％的所述磷脂是peg化磷脂且所述peg化磷脂包含具有分子量为1500g/mol至5000g/mol的peg基团，可选地，其中所述peg化磷脂包含具有分子量为1800g/mol至2200g/mol的peg基团。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的混合物，其特征在于，所述非peg化磷脂是甘油磷脂和/或所述peg化磷脂是甘油磷脂。
5.根据权利要求4所述的混合物，其特征在于，
6.根据权利要求4或5所述的混合物，其特征在于，所述非peg化磷脂包含dphpc，和/或所述peg化磷脂包含dppe-mpeg2000。
7.根据权利要求6所述的混合物，其特征在于，所述磷脂包含dphpc和dppe-mpeg2000，并且其中所述磷脂包含2.5mol％至15mol％的dppe-mpeg2000，可选为5mol％至15mol％的dppe-mpeg2000。
8.一种水性物体，包含水性介质，并且还包含在所述水性物体的至少部分表面上的磷脂分子混合物的外层，其中所述磷脂分子混合物是根据权利要求1至7中任一项所述的混合物。
9.根据权利要求8所述的物体，其特征在于，所述磷脂分子的外层封装所述水性物体。
...【专利技术属性】
技术研发人员：哈根·贝利，迈克尔·布司，
申请(专利权)人：牛津大学创新有限公司，
类型：发明
国别省市：
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