【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
1、需要新颖治疗方式来解决未满足的医疗需求。
技术实现思路
1、本文描述了药物dna组合物，构建体，制剂，使用这样的组合物、构建体和制剂的方法，及其制备方法。
2、在一些方面，本披露提供了药物配制品，其包含：含有单链dna(ssdna)的lnp，其中所述ssdna：(a)编码治疗性蛋白，(b)是共价闭合的，(c)不形成长于100个碱基对的双链结构，(d)长度超过200个核苷酸，并且(e)不包含蛋白端粒酶靶序列；其中所述药物配制品基本上不含线性dna和蛋白质。在一些实施例中，ssdna不形成长于40个碱基对的双链结构。
3、在一些实施例中，ssdna包含与编码治疗性多肽的序列可操作地连接的启动子序列。在一些实施例中，治疗性蛋白选自由以下组成的组：转录因子、染色质重塑因子、抗原、肽、激素、酶、抗体、受体配体、受体、凝血因子和膜蛋白。在一些实施例中，ssdna具有30％-40％、40％-50％、50％-60％或60％-70％的gc含量。
4、在一些...
【技术保护点】
1.一种制备环状ssDNA的方法，所述方法包括：
2.一种制备环状ssDNA的方法，所述方法包括：
3.一种制备环状ssDNA的方法，所述方法包括：
4.一种制备环状ssDNA的方法，所述方法包括：
5.如权利要求2-4中任一项所述的方法，其中所述环状dsDNA：
6.如权利要求1和3-5中任一项所述的方法，其中b)包括在允许选自Nb.BsrDI或Nt.BspQI的切口核酸内切酶切割所述dsDNA中的切口识别位点的条件下，使所述环状dsDNA与识别所述dsDNA中的所述位点的所述切口核酸内切酶接触，从而产生带...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种制备环状ssdna的方法，所述方法包括：
2.一种制备环状ssdna的方法，所述方法包括：
3.一种制备环状ssdna的方法，所述方法包括：
4.一种制备环状ssdna的方法，所述方法包括：
5.如权利要求2-4中任一项所述的方法，其中所述环状dsdna：
6.如权利要求1和3-5中任一项所述的方法，其中b)包括在允许选自nb.bsrdi或nt.bspqi的切口核酸内切酶切割所述dsdna中的切口识别位点的条件下，使所述环状dsdna与识别所述dsdna中的所述位点的所述切口核酸内切酶接触，从而产生带切口的dsdna。
7.如权利要求1、2和4-6中任一项所述的方法，其中c)包括在允许所述带切口的链降解(例如，完全降解)的条件下，使所述带切口的dsdna与t7外切核酸酶接触。
8.如权利要求1-3和5-7中任一项所述的方法，所述方法进一步包括：d)对所述环状ssdna进行凝胶纯化。
9.如权利要求1-8中任一项所述的方法，其中产生所述环状dsdna包括以下中的一项或多项(例如，2、3、4或全部)：
10.如权利要求1-9中任一项所述的方法，所述方法包括一个或多个纯化步骤，例如，凝胶纯化或者使用dna纯化柱。
11.如权利要求10所述的方法，其中对以下进行所述纯化步骤：
12.如权利要求1-11中任一项所述的方法，所述方法不包括有机萃取步骤(例如，苯酚-氯仿萃取步骤)。
13.如权利要求1-12中任一项所述的方法，其中c)包括使所述带切口的dsdna与所述外切核酸酶(例如，所述t7外切核酸酶)接触15-120分钟，例如，20-60分钟，例如，约30分钟。
14.如权利要求1-13中任一项所述的方法，其中将不连续性引入所述环状dsdna的一条链中包括在两个相邻的核苷酸之间引入切口。
15.如权利要求1-14中任一项所述的方法，其中将不连续性引入所述环状dsdna的一条链中包括去除核苷酸，例如，其中所述核苷酸是尿嘧啶。
16.一种组合物(例如，药物组合物)，其包含：
17.一种组合物(例如，药物组合物)，其包含：
18.一种组合物(例如，药物组合物)，其包含：
19.一种组合物(例如，药物组合物)，其包含：
20.一种组合物(例如，药物组合物)，其包含至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10mg的含有效应子序列的共价闭合的单链dna(ssdna)。
21.一种组合物(例如，药物组合物或制造中间体)，其包含：
22.如权利要求16-21中任一项所述的组合物或方法，其中所述ssdna不置于载剂中。
23.如权利要求16-21中任一项所述的组合物，所述组合物进一步包含载剂。
24.如权利要求23所述的组合物，其中所述载剂是基于脂质的载剂。
25.如权利要求24所述的组合物，其中所述基于脂质的载剂是脂质纳米颗粒(lnp)。
26.如权利要求16-22中任一项所述的组合物，将其配制用于裸施用。
27.如权利要求16-26中任一项所述的组合物，将其配制用于肠胃外施用。
28.如权利要求16-26中任一项所述的组合物，将其配制用于局部施用。
29.如权利要求16-26中任一项所述的组合物，其基本上不含选自由以下组成的组的杂质或副产物：内毒素、单核苷酸、经修饰的单核苷酸、双链dna、dna片段或截短物、蛋白质(例如酶，例如连接酶、限制酶)。
30.一种评估包含ssdna的组合物的样品的方法，所述方法包括确定是否满足条件，其中所述条件选自：
31.如权利要求30所述的方法，所述方法进一步包括如果满足所述条件，则对所述组合物进行下游加工步骤，其中任选地所述下游加工步骤选自：将所述组合物分成部分，将所述组合物包装，将所述组合物标记，将所述组合物运输，将所述组合物分配，将所述组合物储存或将所述组合物投入商业中。
32.如权利要求30或31所述的方法，其中所述组合物是如权利要求16-29中任一项所述的组合物。
33.如权利要求30-32中任一项所述的方法，其中所述组合物是通过如权利要求1-15中任一项所述的方法制备的。
34.一种将效应子递送至受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用如权利要求16-29中任一项所述的组合物。
35.一种调节细胞、组织或受试者中的生物学参数的方法，所述方法包括向所述细胞、组织或受试者施用如权利要求16-29中任一项所述的组合物。
36.如前述权利要求中任一项所述的组合物或方法，其中所述ssdna不形成长于100个碱基对的双链结构。
37.如前述权利要求中任一项所述的组合物或方法，其中所述ssdna包含化学修饰，例如，对糖的化学修饰、对碱基的化学修饰或对核酸主链的化学修饰。
38.如前述权利要求中任一项所述的组合物或方法，其中所述ssdna不是噬菌体基因组。
39.如前述权利要求中任一项所述的组合物或方法，其中所述ssdna缺乏噬菌体包装位点。
40.如前述权利要求中任一项所述的组合物或方法，其中所述ssdna缺乏噬菌体复制起点。
41.如前述权利要求中任一项所述的组合物或方法，其中所述ssdna不编码噬菌体衣壳基因。
42.如前述权利要求中任一项所述的组合物或方法，其中所述ssdna不是通过滚环扩增产生的。
43.如前述权利要求中任一项所述的组合物或方法，其中所述ssdna不是通过链置换扩增产生的。
44.如前述权利要求中任一项所述的组合物或方法，其中所述ssdna不包含蛋白端粒酶靶序列。
45.如前述权利要求中任一项所述的组合物或方法，其中所述ssdna不包含发夹结构。
46.如前述权利要求中任一项所述的组合物或方法，其中所述ssdna不包含与第二序列杂交的第一序列，其中所述第一序列和所述第二序列为至少5nt长，并且其中所述第一序列和所述第二序列的位置彼此相距小于6...
【专利技术属性】
技术研发人员：亚历山德拉·雷切尔·斯奈德，雅各布·罗森布鲁姆·鲁本斯，纳拉哈里·苏班纳·普贾尔，莫莉·克里桑·吉布森，本杰明·安德鲁·波特尼，杰弗里·A·冯·马尔扎恩，卡米洛·阿亚拉·布雷顿，
申请(专利权)人：旗舰创业创新七公司，
类型：发明
国别省市：
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