【技术实现步骤摘要】
本专利技术大体涉及生物，具体而言，涉及一种nk细胞冻存液及其应用。
技术介绍
1、1976年nk细胞首次被定义。nk细胞传统上被认为是固有免疫的效应淋巴细胞，是宿主抵御病原微生物的重要防线。不同于t细胞和b细胞，nk细胞的细胞毒性不依赖于人淋巴细胞抗原分子(human lymphocyte antigen,hla)，是人体抗击恶性肿瘤的重要效应细胞。
2、通常，当nk细胞识别靶细胞时，细胞毒性颗粒会移动到免疫突触，并将其细胞毒性颗粒蛋白释放到突触中，进行脱颗粒作用。脱颗粒作用可以通过受配体介导的活化信号和抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(antibody-dependent cell cytotoxity,adcc)两种方式产生。nk细胞除了具有直接的细胞毒性外，还分泌多种调节性细胞因子和趋化因子，调节其他固有性和适应性免疫细胞活性，发挥抗肿瘤免疫作用。活化的nk细胞可分泌细胞因子ifn-γ、tnf-α、il-10、flt3lg和趋化因子配体ccl3、ccl4、ccl5。ifn-γ可促进巨噬细胞和样细胞的激活，启动cd4+t细胞向th1型分化，并诱导抗原呈递细胞mhc-ii类分子表达。ifn-γ还抑制肿瘤细胞外基质纤维连接蛋白表达，抑制肿瘤转移。此外，ifn-γ和tnf-α可直接诱导肿瘤细胞周期阻滞，抑制肿瘤细胞生长。释放的tnf-α可促进b细胞增殖以及单核细胞和巨噬细胞的分化。
3、有鉴于nk细胞所发挥的重要功能，其可以通过nk细胞输注、细胞因子补充等方式参与到肿瘤等基本的治疗中，并且已经取得了诸多成效。临
4、冻存培养基能支持细胞并防止冰晶形成。对于不同的细胞系、冻存条件而言，使用不同的冻存培养基的冻存效果往往大不相同。现有技术鲜少有针对nk细胞进行设计的冻存液。
技术实现思路
1、本专利技术涵盖如下技术方案：
2、本专利技术涉及一种nk细胞冻存液，其包含1v/v％～3v/v％右旋糖苷、10ng/ml～30ng/ml rock抑制剂以及200u/ml～800u/ml il-7。
3、本专利技术还涉及一种nk细胞的冻存方法，其包括如下步骤：
4、i)使将被冻存的nk细胞与如上所述的nk细胞冻存液混合，从而获得冷冻保存组合物，随后降低所述冷冻保存组合物的温度至冷冻保存温度；以及任选的ii)在所述的nk细胞冻存液中将nk细胞解冻。
5、虽然此前现有技术中也曾有il-7在抗nk细胞凋亡应用中的相关报道，但并未有关于其与nk细胞冻存影响的研究，且也没有其与右旋糖苷以及rock抑制剂配合使用的报道。本专利技术首次发现了il-7与右旋糖苷以及rock抑制剂配合所实现的显著的抗冻存所造成的nk细胞凋亡效果，并保持较高的冻存后细胞的杀伤活性。
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1.NK细胞冻存液，其特征在于，包含1v/v％～3v/v％右旋糖苷、10ng/mL～30ng/mLROCK抑制剂以及200U/mL～800U/mL IL-7。
2.根据权利要求1所述的NK细胞冻存液，其特征在于，所述ROCK抑制剂为Y-27632。
3.根据权利要求1所述的NK细胞冻存液，其特征在于，所述NK细胞冻存液还含有动物血清，所述动物血清可以为牛血清，优选胎牛血清，更优选所述动物血清含量为30v/v％～65v/v％。
4.根据权利要求1所述的NK细胞冻存液，其特征在于，所述NK细胞冻存液还含有基础培养基，所述基础培养基可选自X VIVO-15、RPMI1640、AIM-V、α-MEM和DMEM培养基；优选所述基础培养基含量为30v/v％～65v/v％。
5.根据权利要求1～4任一项所述的NK细胞冻存液，其特征在于，其还包含至少一种额外的冷冻保护剂；优选含有5v/v％～12v/v％二甲基亚砜。
6.根据权利要求5所述的NK细胞冻存液，其特征在于，所述额外的冷冻保护剂可选自乙酰胺、琼脂、海藻酸盐或酯、异麦芽糖寡糖、1
7.根据权利要求1～4任一项所述的NK细胞冻存液，其特征在于，其还包括能够在0℃～-196℃下维持大致中性的pH缓冲试剂。
8.NK细胞的冻存方法，其特征在于，包括如下步骤：
9.根据权利要求8所述的冻存方法，其特征在于，所述冷冻保存组合物中NK细胞的浓度为1×10(6～8)个/mL。
...【技术特征摘要】
1.nk细胞冻存液，其特征在于，包含1v/v％～3v/v％右旋糖苷、10ng/ml～30ng/mlrock抑制剂以及200u/ml～800u/ml il-7。
2.根据权利要求1所述的nk细胞冻存液，其特征在于，所述rock抑制剂为y-27632。
3.根据权利要求1所述的nk细胞冻存液，其特征在于，所述nk细胞冻存液还含有动物血清，所述动物血清可以为牛血清，优选胎牛血清，更优选所述动物血清含量为30v/v％～65v/v％。
4.根据权利要求1所述的nk细胞冻存液，其特征在于，所述nk细胞冻存液还含有基础培养基，所述基础培养基可选自x vivo-15、rpmi1640、aim-v、α-mem和dmem培养基；优选所述基础培养基含量为30v/v％～65v/v％。
5.根据权利要求1～4任一项所述的nk细胞冻存液，其特征在于，其还包含至少一种额外的冷冻保护剂；优选含有5v/v％～12v/v％二甲基亚砜。
6.根据权利要求5所述的nk细胞冻存液，其特征在于，所述额外...
【专利技术属性】
技术研发人员：秦臻，牟春琳，左星晨，李梦倩，王秀娥，
申请(专利权)人：天津华域药业有限公司，
类型：发明
国别省市：
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