合成的基因组编辑系统技术方案

本发明专利技术提供了一种合成的、用于DNA修饰的模块化系统，如可以用于基因组编辑，所述系统包含靶向核酸，其具有DNA靶向能力和结合模块化多肽组分的识别模块的能力，其中模块化多肽组分还包括效应子组分和短肽DNA‑结合序列(DBD)，其结合靶中的预定序列(PBS)。DBD优选不超过15mer并且用于结合时使靶向的dsDNA结构失去稳定，从而促进所需的DNA修饰。例如，效应子组分可以是人工切口酶，其包含连接的自组装肽，由此提供有利的用于将载体递送至细胞的小尺寸的完整基因组编辑系统。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】

专利
本专利技术提供了一种合成的用于dna修饰的模块化系统，如可以用于基因组编辑，其包含具有dna靶向能力和结合模块化多肽的识别模块的能力的靶向核酸，其中模块化多肽还包括作为单独模块的效应子组分。效应子组分可以是单独或例如在二聚化后用于修饰基因的结构或调节基因的蛋白质组分。理想地，它可以是包含连接的自组装短肽的多聚体的人工切口酶，如本文现在也教导的。通过在模块化多肽组分中另外包括缺乏酶活性并且识别靶标中的预定序列的短肽dna结合组分，已经获得了完全合成的基因修饰工具，其远小于crispr-cas9单向导rna(sgrna)基因修饰系统，从而易于递送至细胞。多肽组分可以在单个aav载体中与靶向核酸一起递送。专利技术背景rna引导的crispr-cas9系统和其他rna引导的crispr-cas系统已经彻底改变了基因编辑领域，因为最初的研究显示sgrna在靶dna中的原间隔序列(protospacer)邻近基序(pam)识别时指导crispr-cas9双链dna断裂的能力。然而，关于将这种rna引导的dna靶向系统用于所有所需目的，尤其是用于治疗性基因组修饰，仍有待解决的若干限本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于修饰靶核酸序列的核蛋白复合物，其包含(A)靶向核酸和(B)模块化多肽组分，

2.根据权利要求1所述的核蛋白复合物，其中所述模块化多肽组分包含：

3.根据权利要求1或权利要求2所述的核蛋白复合物，其中所述靶向核酸是RNA。

4.根据权利要求1至3任一项所述的核蛋白复合物，其中所述靶向核酸的识别元件是RNA支架(RS)，其结合提供所述模块化多肽组分的模块(a)的RNA支架结合结构域(RSBD)，例如，所述RS是19nt Box B RNA基序，并且所述RSBD是如SEQ.ID.No.2所示的λN22肽。

5.根据权利要求4所述的核蛋...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

1.一种用于修饰靶核酸序列的核蛋白复合物，其包含(a)靶向核酸和(b)模块化多肽组分，

2.根据权利要求1所述的核蛋白复合物，其中所述模块化多肽组分包含：

3.根据权利要求1或权利要求2所述的核蛋白复合物，其中所述靶向核酸是rna。

4.根据权利要求1至3任一项所述的核蛋白复合物，其中所述靶向核酸的识别元件是rna支架(rs)，其结合提供所述模块化多肽组分的模块(a)的rna支架结合结构域(rsbd)，例如，所述rs是19nt box b rna基序，并且所述rsbd是如seq.id.no.2所示的λn22肽。

5.根据权利要求4所述的核蛋白复合物，其包含作为所述组分(a)的全核酸组分(nac)和(b)模块化多肽组分，其中nac包含：

6.根据权利要求4或5所述的核蛋白复合物，其中所述靶向核酸或所述nac提供两个或更多个相同或不同的rna支架。

7.根据权利要求1至6任一项所述的核蛋白复合物，其中靶是dsdna。

8.根据权利要求1至7任一项所述的核蛋白复合物，其中所述dbd不超过30mer、不超过25mer、不超过20mer、优选不超过15mer。

9.根据权利要求8所述的核蛋白复合物，其中靶是dsdna，并且所述dna结合结构域结合3-6个核苷酸的预定序列。

10.根据权利要求9所述的核蛋白复合物，其中所述dbd是不超过15个氨基酸的肽，例如序列sletwlkhrekdggs(seq.id.no.4)的15mer，其结合由5'至3'序列5'gaggtc3'表示的dsdna序列。

11.根据权利要求1至10任一项所述的核蛋白复合物，其中所述dbd能够结合多于一个预定序列。

12.根据权利要求1至11任一项所述的核蛋白复合物，其中所述模块化多肽组分另外提供核定位信号(nls)和/或细胞器定位信号，其中所述nls和/或细胞器定位信号在n-或c-末端提供，任选地与另外的序列连接以帮助检测。

13.根据前述任一项权利要求所述的核蛋白复合物，其中所述效应子组分选自(i)用于产生双链断裂的核酸内切酶或fok 1核酸酶结构域，(ii)切口酶，(iii)转录激活子，(iv)转录阻遏子，(v)表观遗传调节酶，(vii)重组酶，(viii)转座酶，(ix)整合酶和(x)核碱基修饰酶构建体。

14.根据权利要求13所述的核蛋白复合物，其中所述效应子组分是人工核酸酶或切口酶，其包含形成β折叠结构的连接的自组装肽的多聚体，其中：

15.根据权利要求14所述的核蛋白复合物，其中模块化多肽组分不超过220-300个氨基酸，不包括任何可切割标签或定位信号或除组分(a)-(d)之外的任何其他序列。

16.根据权利要求14或权利要求15所述的核蛋白复合物，其中形成所述多聚体的所述肽是相同的7mer或包含两个或更多个不相同的7mer，其中交替的疏水性残基是以n-末端残基开始的亮氨酸和/或异亮氨酸。

17.根据权利要求14至16任一项所述的核蛋白复合物，其中形成所述多聚体的所述肽是全部在n-末端至c-末端方向上连续...

【专利技术属性】
技术研发人员：穆罕默德·拉吉克·穆罕默德·易卜拉，尼莎·坎瓦尔，奥列格·雷茨金，
申请(专利权)人：铅笔生物科学有限公司，
类型：发明
国别省市：