【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于转染细胞领域，具体涉及一种电穿孔转染表皮干细胞的方法。
技术介绍
1、人表皮干细胞的转染具有一定难度，尤其是转染质粒较大时转染效率很低。目前常用表皮干细胞的转染方法是慢病毒的方法进行转染。虽然慢病毒转染具有一定的优势，但其受自身结构的影响，插入片段的大小受限，当需要转染的质粒较大时无法实现转染。虽然目前没有关于慢病毒载体细胞中出现具有复制能力的慢病毒的报道，但其仍是具有一定的风险，在进行临床试验gmp生产时存在风险。且慢病毒的整合在多数情况下，容易引起肿瘤的形成。
2、电穿孔转染法也是生物学上常用的技术之一。其转染的原理是在被转染的细胞膜上通过短暂的电脉冲，形成短暂的孔，从而使外源的dna或者大分子进入细胞。但如何提高其转染效率以及转染后细胞的活率是技术的关键。
3、dnase即脱氧核糖核酸酶，可以取出dna，但无法水解紧密的核染色质，因此在电转后，细胞膜表面形成短暂的孔，dna进入细胞内部后加入dnase共孵育，可以去细胞质中游离的dna以及卡在细胞膜上的多余dna，从而使细胞膜上的孔可以无障碍的...
【技术保护点】
1.一种电穿孔转染表皮干细胞的方法，其特征在于，采用DnaseI对表皮干细胞进行电穿孔转染。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述表皮干细胞为人表皮干细胞。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，包括如下步骤：
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述DnaseI的浓度范围为20～60U，优选为40U。
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述DnaseI与质粒的浓度比为40U/4μg。
6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述表皮干细胞的浓度为2E6/100μL。
...【技术特征摘要】
1.一种电穿孔转染表皮干细胞的方法，其特征在于，采用dnasei对表皮干细胞进行电穿孔转染。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述表皮干细胞为人表皮干细胞。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，包括如下步骤：
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述dnasei的浓度范围为20～60u，优选为40u。
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述dnasei与质粒的浓度比为40u/4μg。
6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述表皮干细胞的浓度为2e6/100μl。
7.根据权利要求3所述的方法...
【专利技术属性】
技术研发人员：白文静，李怡君，张丽雯，陈倩倩，丛伟立，
申请(专利权)人：上海精缮生物科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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