一种临床级CAR-NK细胞药物注射液的制备方法与应用技术

本发明专利技术属于生物工艺技术，公开了一种临床级CAR‑NK细胞药物注射液的制备方法与应用，包括以下步骤，从外周血单个核细胞中分选出NK细胞；使用滋养细胞激活NK细胞，再使用带有嵌合抗原受体基因的病毒载体感染激活后的NK细胞；然后使用NK细胞扩增培养基进行CAR‑NK细胞的扩增培养，获得大量的CAR‑NK细胞；收集CAR‑NK细胞，制备成CAR‑NK细胞药物注射液。本发明专利技术提供方法制备的CAR‑NK细胞，细胞数量多，可达10<supgt;10</supgt;以上，纯度高达98%以上，CAR阳性率高，可达85%以上，杀伤活性高，可供临床回输使用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物工艺技术，公开了car-nk细胞的制备技术，具体为一种临床级car-nk细胞的制备方法和应用。

技术介绍

1、nk细胞又称自然杀伤细胞(natural killer cell，nk细胞)，是机体内重要的免疫细胞，nk细胞形态上属于大颗粒淋巴细胞，来源于骨髓，是除t细胞、b细胞之外的第三大类淋巴细胞，约占血液中所有免疫细胞（白细胞数量）的15%，属于天然免疫系统的核心细胞。nk细胞具有广谱的抗肿瘤作用，不需要肿瘤特异性识别，且不会被细胞表面的主要组织相容性复合体(mhc)抑制活性限制。nk细胞对肿瘤细胞具有较强杀伤力，通过nk表面激活型受体和抑制性受体识别肿瘤细胞，释放穿孔素和颗粒酶、表达各种肿瘤坏死因子诱导肿瘤细胞凋亡，同时通过抗体依赖的细胞毒作用杀伤肿瘤。鉴于nk细胞天然抗肿瘤的特性，nk细胞成为了研究人员开发新型免疫疗法的理想选择之一。目前，正在开发的nk细胞治疗产品主要有两类：一类是自体或是异体nk细胞治疗产品，另一类是基因工程化的car-nk产品。

2、car-nk细胞是指将nk细胞经过嵌合抗原受体（car）基因修饰，本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种临床级CAR-NK细胞的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.一种临床级CAR-NK细胞药物注射液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

3.根据权利要求1或者2所述的制备方法，其特征在于，采用磁珠分选法从单个核细胞中分选出NK细胞；分选时，分选缓冲液为NK无血清培养基。

4.根据权利要求1或者2所述的制备方法，其特征在于，所述滋养细胞为辐照K562细胞；滋养细胞与NK细胞的比例为1:1～4:1，激活的时间为3～6天。

5.根据权利要求1或者2所述的制备方法，其特征在于，NK细胞扩增培养基为NK无血清培养基中添加血小板裂解物、血...

【技术特征摘要】

1.一种临床级car-nk细胞的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.一种临床级car-nk细胞药物注射液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

3.根据权利要求1或者2所述的制备方法，其特征在于，采用磁珠分选法从单个核细胞中分选出nk细胞；分选时，分选缓冲液为nk无血清培养基。

4.根据权利要求1或者2所述的制备方法，其特征在于，所述滋养细胞为辐照k562细胞；滋养细胞与nk细胞的比例为1:1～4:1，激活的时间为3～6天。

5.根据权利要求1或者2所述的制备方法，其特征在于，nk细胞扩增培养基为nk无血清培养基中添加血小板裂解物、血清替代物、il-2、il-15、il-21的一种或多种添加剂；所述血小板裂解物的浓度为1～10%vv，血清替代物的浓度为1～10%vv，il-2浓度为100～1000iu/ml，il～15浓度为5~50ng/ml，il～21...

【专利技术属性】
技术研发人员：王看看，钱浩，
申请(专利权)人：南京恩瑞恺诺生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：