一种同时高效富集乙酰化修饰肽段和巴豆酰化修饰肽段的方法技术

本发明专利技术提供了一种同时高效富集乙酰化修饰肽段和巴豆酰化修饰肽段的方法，在将蛋白酶切成肽段后，利用乙酰化泛抗体偶联树脂与巴豆酰化泛抗体偶联树脂混合进行同时富集，或是先利用一种抗体偶联树脂进行富集后，将流穿用于另一种抗体偶联树脂进行富集，之后将两次富集的肽段进行混合，再一起进行一次液相色谱串联质谱上机测试，解决了微量样本或难以获取的样本难以对多种修饰进行同时鉴定的难题，并节省了人力物力。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于肽段富集，涉及一种同时高效富集乙酰化修饰肽段和巴豆酰化修饰肽段的方法。

技术介绍

1、蛋白质翻译后修饰在各种生命过程中扮演着重要的作用，然而这些修饰的丰度一般都较低，需要经过特殊的材料或抗体进行富集后才能检测。修饰组学的常规流程是获取样本、提取蛋白(加相应的修饰酶的抑制剂)、还原烷基化、胰酶酶切、特异性富集、液相色谱串联质谱检测和搜库分析，其中针对各种修饰的特异性富集，最常见的方法还是利用富集材料(包括抗体)进行富集，之后对富集的肽段进行单针或分级后的检测。比如目前常用的针对磷酸化修饰肽段的富集，常用的有抗体、tio2、imac等材料，针对各种酰化修饰(乳酸化、琥珀酰化、巴豆酰化等)的肽段，均有各自的特异性抗体进行富集。

2、目前这种富集修饰肽段的方式，一种修饰的肽段需要用一种或多种材料/抗体进行富集，然后进行一次液相色谱串联质谱检测，这种富集和检测方式会需要成倍量的增加样本的起始量，对于少量样本只能做一种修饰的鉴定，且多次富集多次检测会比较浪费人力和物力；对于每增加的一种修饰类型的鉴定，都需要相应的去增加起始的样本量，但是在临床本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种同时富集乙酰化修饰肽段和巴豆酰化修饰肽段的方法，其特征在于，将乙酰化泛抗体偶联树脂与巴豆酰化泛抗体偶联树脂进行混合得到混合树脂，采用混合树脂对肽段进行富集。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述乙酰化泛抗体为泛乙酰化1号抗体、泛乙酰化2号抗体或泛乙酰化3号抗体中的任意一种或多种；所述泛乙酰化1号抗体的抗原序列为IGSSMK(Ac)SVGEVMAIGR，泛乙酰化2号抗体的抗原序列为GYVK(Ac)AGPWTPEAAVEHPEAVR，泛乙酰化3号抗体的抗原序列为HLIPAANTGESK(Ac)VFYYK。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述乙...

【技术特征摘要】

1.一种同时富集乙酰化修饰肽段和巴豆酰化修饰肽段的方法，其特征在于，将乙酰化泛抗体偶联树脂与巴豆酰化泛抗体偶联树脂进行混合得到混合树脂，采用混合树脂对肽段进行富集。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述乙酰化泛抗体为泛乙酰化1号抗体、泛乙酰化2号抗体或泛乙酰化3号抗体中的任意一种或多种；所述泛乙酰化1号抗体的抗原序列为igssmk(ac)svgevmaigr，泛乙酰化2号抗体的抗原序列为gyvk(ac)agpwtpeaavehpeavr，泛乙酰化3号抗体的抗原序列为hlipaantgesk(ac)vfyyk。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述乙酰化泛抗体包括泛乙酰化1号抗体、泛乙酰化2号抗体和泛乙酰化3号抗体。

4.如权利要求1～3任一项所述的方法，其特征在于，所述巴豆酰化泛抗体为泛巴豆酰化1号抗体、泛巴豆酰化2号抗体、泛巴豆酰化3号抗体中的任意一种或多种；所述泛巴豆酰化1号抗体的抗原序列为lsk(cr)tvetavr，泛巴豆酰化2号抗体的抗原序列为ik(cr)inqiqmk，泛巴豆酰化3号抗体的抗原序列为llvgk(cr)sasvdaek。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述巴豆酰化泛抗体包括泛巴豆酰化2号抗体和泛巴豆酰化3号抗体。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述乙酰化泛抗体偶联树脂与巴豆酰化泛抗体偶联树脂的质量比为(1～2)：(1～4)。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述肽段需溶解在缓冲液中，所述缓冲液中含有tris-hcl、edta、np-40、nacl，ph为7.5～8.0。

8.一种依次富集乙酰化修饰肽段和巴豆酰化修饰肽段的方法，其特征在于，分别采用乙酰化泛抗体偶联树脂和/...

【专利技术属性】
技术研发人员：程仲毅，朱俊，吴佳欢，戚鲁豫，
申请(专利权)人：杭州景杰生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：