【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及文库制备，具体涉及一种巢式多重pcr高通量测序文库制备方法及试剂盒。
技术介绍
1、随着测序技术的发展，对基因组候选区段的重测序需求日益增加，人们对序列的关注超过了少数的snp，候选区段的范围可能在5kb-10m之间。使用传统sanger法或目标区域杂交捕获测序价格昂贵，使用目标区域捕获测序很好地解决了这一难题。目标区域捕获技术可大致分为两种：一种是基于杂交的捕获测序技术，另一种是基于多重pcr的捕获技术。两者通过多重探针或者引物对感兴趣的基因区域一次性捕获，结合高通量测序技术，多样本同时测序，得到目标区域的序列信息。相对于全基因组测序，目标捕获测序技术在大样本量筛查的同时极大地降低成本。但前者的实验流程繁琐，探针成本较高，限制了其在临床上的应用，后者实验操作简单，灵活性强，适用于孟德尔遗传性疾病的筛查和诊断、gwas候选区段重测序、qtl定位区段重测序、精准医疗研究与应用等领域。
2、高通量snp检测服务结合多重pcr和高通量测序技术，对需要检测的位点设计特异性引物，在单管内进行多重pcr扩增，不同的样本以不...
【技术保护点】
1.一种检测低频突变的巢式多重PCR扩增方法，所述方法包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述反向引物中包含的标签序列为分子标签或样本标签。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第二轮PCR扩增中进一步包括使用第二通用引物。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述第二通用引物3’端序列和所述巢式引物5’端的第二通用测序序列部分或者全部序列相同。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在第二轮PCR扩增之后，进一步包括测序步骤：将第二轮PCR扩增产物进行核酸序列测定，获得测序数据。>
6.根据权利...
【技术特征摘要】
1.一种检测低频突变的巢式多重pcr扩增方法，所述方法包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述反向引物中包含的标签序列为分子标签或样本标签。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第二轮pcr扩增中进一步包括使用第二通用引物。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述第二通用引物3’端序列和所述巢式引物5’端的第二通用测序序列部分或者全部序列相同。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在第二轮pcr扩增之后，进一步包括测序步骤：将第二轮pcr扩增产物进行核酸序列测定，获得测序数据。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，通过对测序数据的比对分析，获得样本低频突变信息。
7.一种多样本目标区域的巢式多重pcr扩增方法，所述方法包括：
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述第一标签序列用于区分待测核酸的样本来源。
9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，第二轮pcr扩增进一步包括使用第二通用引物，所述第二通用引物3’端序列和所述巢式引物5’端的第二通用测序序列部分或者全部序列相同。
10.根据权利要求7-9任一项所述的方法，其特征在于，在进行第二轮pcr扩增之前，将第一轮pcr扩增产物混合。
11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，所述第一轮pcr扩增产物携带第一标签序列。
12.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，在第二轮pcr扩增之后，进一步包括测序步骤：将第...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨林，张艳艳，陈芳，蒋慧，
申请(专利权)人：深圳华大智造科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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