对蛋白质中的功能组氨酸进行全局分析的方法技术

本申请属于生物技术领域，具体涉及一种对蛋白质中的功能组氨酸进行全局分析的方法、蛋白质组氨酸标记系统及其应用。本申请所提供的对蛋白质中的功能组氨酸进行全局分析的方法包括：提供主要由小分子光敏剂、含目标蛋白的生物体系、以及化学探针组成的第一体系，将第一体系进行光照处理，获得第二体系；将第二体系与点击化学反应试剂混合并进行点击化学反应，然后进行蛋白质组学分析，获得目标蛋白中的组氨酸标记信息。该方法实现了在活细胞对组氨酸位点进行精准标记，选择性高，具有组氨酸的全蛋白质组深度覆盖。由此，本发明专利技术还提供了一种主要由小分子光敏剂、化学探针和点击化学反应试剂组成的蛋白质组氨酸标记系统。

【技术实现步骤摘要】

本申请属于生物，具体涉及一种对蛋白质中的功能组氨酸进行全局分析的方法。

技术介绍

1、化学蛋白质组学，特别是由cravatt小组开创的基于活性的蛋白质分析(abpp)，已经被证明是注释未知蛋白质功能和扩展药物靶点的强力工具。最初开发的化学探针靶向不同蛋白酶家族活性位点中具有增强亲核性的残基，如丝氨酸水解酶、激酶、半胱氨酸蛋白酶、金属蛋白酶、糖苷酶、酪氨酸磷酸酶等等。这些探针揭示了酶在人类生理学和疾病中的新作用，并主导了多种酶抑制剂的开发。为了能够更广泛地探索蛋白质组，化学蛋白质组学的最新研究方向是开发新的生物相容性化学探针在蛋白质组范围来测量亲核残基的的反应活性，而不仅限于特定的蛋白酶家族。例如，碘乙酰胺探针和活化酯探针已被开发用于半胱氨酸和赖氨酸的标记分析，此外针对酪氨酸、甲硫氨酸和天冬氨酸/谷氨酸的化学探针也被开发出来。然而，针对其他亲核性氨基酸的探索较少，仍然有待进一步研究。

2、组氨酸是这些未充分研究的亲核性氨基酸中极具潜力的候选者，它常见于酶活性位点、金属结合位点和蛋白质-蛋白质相互作用界面。具体来说，组氨酸的咪唑侧链既是氢供体又是氢本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种对蛋白质中的功能组氨酸进行全局分析的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述小分子光敏剂为产生单线态氧的II型光敏剂。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述化学探针包括烷胺和/或结构如通式(I)所示的化学探针：

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述化学探针为2-乙炔基苯胺、3-乙炔基苯胺、4-乙炔基苯胺、N-(2-氨基苯基)戊-4-炔基酰胺、3-乙炔基-4-甲基苯胺、3-乙炔基-4-氟苯胺、5-乙炔基-2-氟苯胺、炔丙胺中的至少一种。

5.根据权利要求1-4任一项所述的方法...

【技术特征摘要】

1.一种对蛋白质中的功能组氨酸进行全局分析的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述小分子光敏剂为产生单线态氧的ii型光敏剂。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述化学探针包括烷胺和/或结构如通式(i)所示的化学探针：

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述化学探针为2-乙炔基苯胺、3-乙炔基苯胺、4-乙炔基苯胺、n-(2-氨基苯基)戊-4-炔基酰胺、3-乙炔基-4-甲基苯胺、3-乙炔基-4-氟苯胺、5-乙炔基-2-氟苯胺、炔丙胺中的至少一种。

5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于，所述含目标蛋白的生物体系为活细胞、组织或蛋白质组；和/或

6.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于，所述光照处理的光波长为所述小分子光敏剂的最大吸收波长；和/或

7.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：李刚，翟彦生，张鑫禹，
申请(专利权)人：深圳湾实验室，
类型：发明
国别省市：