一种抗菌多肽偶联类弹性蛋白的构建方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种抗菌多肽偶联类弹性蛋白的构建方法，本申请通过将植物乳杆菌(L.plantarum)中的14氨基酸组成的抗菌肽基因克隆到含有类弹性蛋白(ELP)标签的载体pET‑23a‑ELP上，构建成Elamp14质粒。结合自诱导培养技术并使用可逆相变循环(ITC)纯化法获得高纯度的Elamp14蛋白。经过对其功能分析，发现该蛋白对食品中的有害菌具有抑菌活性。这将减少抗生素的使用，是未来食品保鲜剂和抗生素的优秀替代品。同时，该蛋白具有耐热性，可以更广泛应用到现代食品工业生产中。本技术能够显著降低生产成本，纯化方法简便，适用于工业放大，具有良好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物，具体而言，涉及一种抗菌多肽偶联类弹性蛋白的构建方法与应用。

技术介绍

1、植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)是一种具有良好开发前景的菌株。其作为一种安全的革兰氏阳性细菌，是世界公认安全(gras)的可食用性微生物，并被广泛运用于食品和医药领域。许多研究表明植物乳杆菌能够调节人体免疫、调节肠道菌群、改善肠道功能、产生多种广谱抗菌肽。植物乳杆菌在食品工业中的应用也极为广泛，常用于发酵肉制品以及植物性食品中的风味改善。特别是，由于其具有抑制有害菌生长的能力，因此广泛应用于食品开发的多个领域。

2、植物乳杆菌分泌的肽类物质能够与细菌细胞膜上的受体发生相互作用，进而破坏细胞膜，导致细胞内含物的泄漏和细胞死亡。有研究表明l.plantarum jy22能够分泌新型细菌素用于抑制蜡样芽孢杆菌的生长。传统发酵白菜中分离的l.plantarum jla-9菌，能够产生抑制芽孢杆菌的细菌素jla-9。其能够抑制蜡样芽孢杆菌的氧化代谢功能，从而影响细胞壁的合成，破坏膜结构，进而抑制蜡样芽孢杆菌的生长。

3、本本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种抗菌多肽偶联类弹性蛋白的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，在构建Elamp14重组质粒步骤中，设计上游引物F5且所述上游引物F5包含载体pET-23a-ELP的同源区域、NdeⅠ(CATATG)酶切位点和6×His标签；

3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，PCR产物的长度为102bp，其中抗菌多肽基因长度为42bp，同源片段以及组氨酸标签的总长度为60bp。

4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，在诱导表达Elamp14蛋白步骤中，LB培养基扩培的条件：温度为37...

【技术特征摘要】

1.一种抗菌多肽偶联类弹性蛋白的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，在构建elamp14重组质粒步骤中，设计上游引物f5且所述上游引物f5包含载体pet-23a-elp的同源区域、ndeⅰ(catatg)酶切位点和6×his标签；

3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，pcr产物的长度为102bp，其中抗菌多肽基因长度为42bp，同源片段以及组氨酸标签的总长度为60bp。

4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，在诱导表达elamp14蛋白步骤中，lb培养基扩培的条件：温度为37℃～38℃，转速为180r/min～250r/min，时间为为12h～16h。

5.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，在诱导表达elamp14蛋白步骤中，诱导培养的温度为25℃～28℃，转速为150r/min～200r/min，时间为20h～24h。

6.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，在诱导表达elamp14蛋白步骤中，缓冲液的浓度为：20mm tris-cl(ph8.0)、500mm n...

【专利技术属性】
技术研发人员：张宇博，曲良斌，林威伶，
申请(专利权)人：佛山科学技术学院，
类型：发明
国别省市：