一种DNA纳米笼探针及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种DNA纳米笼探针及其制备方法与应用。该纳米笼探针包括具有内部空腔的DNA框架、由双链RF/RQ构成的miRNA响应探针与A‑HP发夹。该纳米笼探针的制备方法包括：将双链RF/RQ与DNA框架进行退火组装，然后再与A‑HP发夹孵育，形成所述DNA纳米笼探针。本发明专利技术得益于DNA纳米框架的尺寸选择性，更小的成熟miRNA而不是更大的pre‑miRNA才能进入DNA纳米笼的空腔进行分子识别，从而显著减少了pre‑miRNA的信号干扰。同时，DNA纳米笼探针无需转染即可进入细胞中并在内源性酶APE1的驱动下对细胞内miRNA成像进行精准检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种dna纳米笼探针及其制备方法与应用。

技术介绍

1、成熟mirna是一类长度为19-23个核苷酸的非编码rna，可通过与mrna碱基配对在基因表达中发挥关键作用。由于其参与了肿瘤的发生和发展，mirna在肿瘤诊断中被认为是非常有前景的生物标志物。然而，想要实现肿瘤细胞中成熟mirna的准确成像，必须考虑两个重要的影响因素。首先，活细胞内的成熟mirna是由rnase dicer剪切pre-mirna(60-70nt)产生的，故pre-mirna有一部分核酸序列与成熟mirna相同，这意味着pre-mirna也会与探针发生相互作用，从而干扰探针对成熟mirna的准确分析。其次，细胞内mirna的丰度普遍较低，mirna的原位传感成像仍然面临较大的挑战。因此，开发一种高效、可靠、灵敏的信号放大方法精准成像活细胞内的成熟体mirna具有重要的研究意义。

2、尽管目前已经开发出了逆转录实时定量聚合酶链式反应(rt-qpcr)作为mirna检测的金标准方法，但是这种方式往往涉及到rna提取和高温扩增等步骤，不适用于本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种DNA纳米笼探针，其特征在于，所述DNA纳米笼探针包括三个模块：具有内部空腔的DNA框架、miRNA响应探针与A-HP发夹；

2.根据权利要求1所述的纳米笼探针，其特征在于，A-HP发夹上的AP位点被APE1酶特异性识别切割后释放出Fuel单链，其中Fuel单链具有与单链RF的部分核苷酸序列互补的核苷酸序列。

3.根据权利要求1所述的纳米笼探针，其特征在于，所述DNA框架为由6条DNA链作为主体骨架自组装形成的六面体。

4.根据权利要求1～3任一项所述的纳米笼探针，其特征在于，所述双链RF/RQ、A-HP发夹以及DNA框架的核苷酸序列可根据靶标...

【技术特征摘要】

1.一种dna纳米笼探针，其特征在于，所述dna纳米笼探针包括三个模块：具有内部空腔的dna框架、mirna响应探针与a-hp发夹；

2.根据权利要求1所述的纳米笼探针，其特征在于，a-hp发夹上的ap位点被ape1酶特异性识别切割后释放出fuel单链，其中fuel单链具有与单链rf的部分核苷酸序列互补的核苷酸序列。

3.根据权利要求1所述的纳米笼探针，其特征在于，所述dna框架为由6条dna链作为主体骨架自组装形成的六面体。

4.根据权利要求1～3任一项所述的纳米笼探针，其特征在于，所述双链rf/rq、a-hp发夹以及dna框架的核苷酸序列可根据靶标mirna的核苷酸序列进行设计；所述靶标mirna为成熟体mirna。

5.根据权利要求4所述的纳米笼探针，其特征在于，当靶标mirna为mir-21时，其核苷酸序列如seq id no.1所示，dna框架主体骨架的核苷酸序列由如seq id no.2～seq id no.7构成；所述双链rf/rq由单链rf与单链rq杂交而成，单链rf的核苷酸序列如seq id no.8所示，单链rq的核苷酸序列如seq id no.9所示；所述a-hp发夹的核苷酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：柯国梁，高营营，龚超男，张晓兵，宦双燕，陈美，
申请(专利权)人：湖南大学，
类型：发明
国别省市：