一种重组肠激酶轻链或/和其突变体在原核体系中可溶性表达与高效纯化的方法技术

本发明专利技术提供的一种重组肠激酶轻链或/和其突变体在原核体系中可溶性表达及高效纯化的方法，该方法利用两个及以上的Sumo序列串联融合的方法，实现重组肠激酶轻链或/和其突变体在大肠杆菌表达体系中的可溶性表达，避免了传统大肠杆菌体系表达肠激酶轻链或/和其突变体形成包涵体，避免肠激酶轻链或/和其突变体以无结构、无活性的包涵体形式表达，避免下游进行肠激酶轻链或/和其突变体复性的工序；并通过简单的层析步骤从组分复杂的细菌破碎上清液体系中高效纯化得到肠激酶轻链或/和其突变体；具有操作简便，适合规模化放大、周期短、纯度高、工艺稳定等特点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及了重组肠激酶轻链或/和其突变体累的制备，具体涉及了一种重组肠激酶轻链或/和其突变体在原核体系中可溶性表达与高效纯化的方法。

技术介绍

1、肠激酶(ek)(ec 3.4.21.9)是一种丝氨酸蛋白酶，是已知的第一种激活其他酶的酶。人、牛和猪源肠激酶在结构上都是由二硫键连接的重链亚基(80～140kda)和轻链亚基(35～65kda)组成，含有多个糖基化位点，但糖基化与否对肠激酶的活性并不产生显著影响。肠激酶重链主要参与十二指肠内的膜结合和胰蛋白酶原识别，而肠激酶轻链是由糜蛋白酶样丝氨酸蛋白酶结构域组成的丝氨酸蛋白酶，通过切割n-末端六肽val-(asp)4-lys将胰蛋白酶原激活为胰蛋白酶。单独的肠激酶轻链保留了异源二聚体肠激酶的特定活性特征，并且足以对val-(asp)4-lys肽序列进行特异性和酶切。利用肠激酶酶切断裂释放多肽的最大优势在于允许任何下游融合目标蛋白保留其天然n末端，而不会在其n末端留下任何多余的氨基酸残基。这使得肠激酶轻链在利用基因工程技术进行融合蛋白表达、酶切去除融合标签的应用中极具吸引力。肠激酶在各种反应条件下保持活性，本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种可溶性表达及高效纯化重组肠激酶轻链的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的可溶性表达及高效纯化重组肠激酶轻链的方法，其特征在于，所述步骤1中，将人源、牛源或猪源的肠激酶rEK-His或/和其突变体的氨基酸序列依次进行基因序列转换、大肠杆菌宿主偏好密码子优化，获得肠激酶轻链或/和其突变体的基因序列。

3.根据权利要求2所述的可溶性表达及高效纯化重组肠激酶轻链的方法，其特征在于，肠激酶轻链突变体rbEK-His，核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

4.根据权利要求3所述的可溶性表达及高效纯化重组肠激酶轻链的方法，其特征在于...

【技术特征摘要】

1.一种可溶性表达及高效纯化重组肠激酶轻链的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的可溶性表达及高效纯化重组肠激酶轻链的方法，其特征在于，所述步骤1中，将人源、牛源或猪源的肠激酶rek-his或/和其突变体的氨基酸序列依次进行基因序列转换、大肠杆菌宿主偏好密码子优化，获得肠激酶轻链或/和其突变体的基因序列。

3.根据权利要求2所述的可溶性表达及高效纯化重组肠激酶轻链的方法，其特征在于，肠激酶轻链突变体rbek-his，核苷酸序列如seq id no：1所示。

4.根据权利要求3所述的可溶性表达及高效纯化重组肠激酶轻链的方法，其特征在于，sumo蛋白的序列是小泛素相关修饰物，来源物种为酿酒酵母的泛素样蛋白smt3的序列，或对酿酒酵母的泛素样蛋白smt3的一级序列中的一个或数个氨基酸残基进行替换、突变的sumo改造体。

5.根据权利要求1所述的可溶性表达及高效纯化重组肠激酶轻链的方法，其特征在于，所述步骤2中，原核感受态细胞为大肠杆菌或枯草芽孢杆菌。

6.根据权利要求5...

【专利技术属性】
技术研发人员：张纯，余蓉，郑永祥，陈梓杰，
申请(专利权)人：四川大学，
类型：发明
国别省市：