【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及药物分析领域，尤其涉及一种l-5-甲基四氢叶酸钙中4-羟基-5-甲基四氢叶酸的检测方法。
技术介绍
1、l-5-甲基四氢叶酸钙(l-5-mthf-ca)是一种新型的叶酸类药物，它常作为食品添加剂和营养保健品的主要成分，逐渐被人们所熟知。l-5-mthf-ca参与体内很多重要的生化反应，具有重要的药理作用。此类药物可以透过血脑屏障,能够预防老年痴呆，细胞贫血等症状。l-5-mthf-ca与其他药物相比具有疗效显著,功能齐全和副作用少的特点,逐渐成为医学和制药研究领域共同关注的焦点。
2、l-5-甲基四氢叶酸钙在水和碱水中微溶，在乙腈、甲醇、二氯甲烷、正己烷等有机溶剂中几乎不溶，其在水溶液中不稳定，易降解生成4-羟基-5-甲基四氢叶酸。4-羟基-5-甲基四氢叶酸具有一定的毒性，在l-5-甲基四氢叶酸钙中对其残留的控制较为重要。4-羟基-5-甲基四氢叶酸微溶于水和碱水，在甲醇、乙腈存在的情况下其结构会被破坏，该杂质本身在水溶液中也不稳定，易转换回l-5-甲基四氢叶酸，所以对l-5-甲基四氢叶酸钙中4-羟基-5-甲基四氢叶酸含量的准确测定非常重要。
3、目前usp关于l-5-甲基四氢叶酸钙有关物质的检测方法中，将l-5-甲基四氢叶酸钙用稀释剂溶解，通过高效液相色谱连接紫外检测器，从而检测出4-羟基-5-甲基四氢的含量，所述高效液相色谱的流动相为50mmol/l的磷酸二氢钠，稀释剂为水。而l-5-甲基四氢叶酸钙水溶液中会发生明显降解，生成4-羟基-5-甲基四氢，影响其检测结果，且50mmol/l的磷酸
技术实现思路
1、本专利技术要解决的技术问题是克服现有技术存在的缺陷，本专利技术提出了一种l-5-甲基四氢叶酸钙中4-羟基-5-甲基四氢叶酸的检测方法，4-羟基-5-甲基四氢叶酸的分离度好，专属性强，溶液稳定性较好,检测结果准确稳定。
2、为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案是：一种l-5-甲基四氢叶酸钙中4-羟基-5-甲基四氢叶酸的检测方法，包括如下步骤：
3、s1、配制l-5-甲基四氢叶酸钙供试品溶液；
4、s2、配制4-羟基-5-甲基四氢叶酸对照品溶液；
5、s3、以高效液相色谱法对l-5-甲基四氢叶酸钙中的4-羟基-5-甲基四氢叶酸进行检测；
6、于s3中，检测波长为280nm，色谱柱为merck purospherstarrp-18endcapped，柱温为32℃；
7、流动相包括流动相a以及流动相b，所述流动相a为磷酸二氢钠水溶液，所述流动相b为磷酸二氢钠水溶液和甲醇的混合溶液，所述磷酸二氢钠水溶液浓度为20mmol/l，于流动相b中甲醇与磷酸二氢钠水溶液的比例为35:65(v/v)；
8、所述流动相流速为1.1ml/min，流动相以下表所示梯度进行线性梯度洗脱：
9、 时间(分钟) 流动相a(％) 流动相b(％) 0 100 0 15 50 50 20 0 100 25 0 100 25.01 100 0 33 100 0
10、；
11、s4、取供试品溶液以及对照品溶液注入液相色谱仪进行测定，记录色谱图并计算4-羟基-5-甲基四氢叶酸含量。
12、进一步地，所述流动相a的ph值为6.5，所述流动相b的ph值为8.0。
13、进一步地，于s1以及s2之中以稀释剂完成l-5-甲基四氢叶酸钙供试品溶液以及4-羟基-5-甲基四氢叶酸对照品溶液的配制，于所述稀释剂之中，包括异丙醇、乙醇以及水，异丙醇：乙醇：水＝2:1:8。
14、进一步地，于所述l-5-甲基四氢叶酸钙供试品溶液之中，每1ml含有0.5mg l-5-甲基四氢叶酸钙。
15、进一步地，于所述4-羟基-5-甲基四氢叶酸对照品溶液之中，每1ml含有5μg 4-羟基-5-甲基四氢叶酸。
16、进一步地，于s3之中，进样盘控温为8℃，进样量为10μl。
17、与现有技术相比，本专利技术的有益效果包括：
18、1)初始梯度采用20mmol/l磷酸二氢钠水溶液进行洗脱，使得4-羟基-5-甲基四氢叶酸和常规溶剂峰能够明显分离，且采用ph为6.5的磷酸二氢钠溶液作为初始梯度，能够增强4-羟基-5-甲基四氢叶酸的保留，实现反相色谱分离；且20mmol/l磷酸二氢钠浓度较低，对色谱柱的耐用时长影响较小；
19、2)于稀释剂中加入异丙醇和乙醇，能够保证检测样品的结构完整性，一定程度上使得供试品溶液保持稳定，抑制4-羟基-5-甲基四氢叶酸和l-5-甲基四氢叶酸的相互转换，使得检测结果稳定可靠；
20、3)检测试剂配制简单，检测条件容易达成，方便日常检测4-羟基-5-甲基四氢叶酸的含量。
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1.一种L-5-甲基四氢叶酸钙中4-羟基-5-甲基四氢叶酸的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的L-5-甲基四氢叶酸钙中4-羟基-5-甲基四氢叶酸的检测方法，其特征在于，所述流动相A的pH值为6.5，所述流动相B的pH值为8.0。
3.根据权利要求1所述的L-5-甲基四氢叶酸钙中4-羟基-5-甲基四氢叶酸的检测方法，其特征在于，于S1以及S2之中以稀释剂完成L-5-甲基四氢叶酸钙供试品溶液以及4-羟基-5-甲基四氢叶酸对照品溶液的配制，于所述稀释剂之中，包括异丙醇、乙醇以及水，异丙醇：乙醇：水＝2:1:8。
4.根据权利要求3所述的L-5-甲基四氢叶酸钙中4-羟基-5-甲基四氢叶酸的检测方法，其特征在于，于所述L-5-甲基四氢叶酸钙供试品溶液之中，每1mL含有0.5mg L-5-甲基四氢叶酸钙。
5.根据权利要求3所述的L-5-甲基四氢叶酸钙中4-羟基-5-甲基四氢叶酸的检测方法，其特征在于，于所述4-羟基-5-甲基四氢叶酸对照品溶液之中，每1mL含有5μg 4-羟基-5-甲基四氢叶酸。
6.根
...【技术特征摘要】
1.一种l-5-甲基四氢叶酸钙中4-羟基-5-甲基四氢叶酸的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的l-5-甲基四氢叶酸钙中4-羟基-5-甲基四氢叶酸的检测方法，其特征在于，所述流动相a的ph值为6.5，所述流动相b的ph值为8.0。
3.根据权利要求1所述的l-5-甲基四氢叶酸钙中4-羟基-5-甲基四氢叶酸的检测方法，其特征在于，于s1以及s2之中以稀释剂完成l-5-甲基四氢叶酸钙供试品溶液以及4-羟基-5-甲基四氢叶酸对照品溶液的配制，于所述稀释剂之中，包括异丙醇、乙醇以及水，异丙醇：乙醇：水＝2:1:8。
<...【专利技术属性】
技术研发人员：钱益波，韦俞，刘桂芳，孟电力，奚红亮，黄春，王旭阳，
申请(专利权)人：无锡紫杉药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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