【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
1、rna干扰(rnai)是由小干扰rna(sirna)介导的序列特异性转录后基因沉默的过程。对影响rnai以使靶基因的表达特异性沉默的能力给予了相当大的关注，以实现期望的治疗效果。
2、sirna治疗面临的挑战是巨大的。这是因为sirna的固有特性，如聚阴离子性、易受核酸酶切割，由于细胞摄取差和清除快而使临床应用困难。另外，由于有害的蛋白质结合或mrna的错误靶向而产生的脱靶效应可以进一步限制sirna疗法。
3、因此，越来越需要开发脱靶效应大大降低的强效sirna。
技术实现思路
1、本公开至少部分地基于显示出降低的脱靶效应的经修饰的小干扰rna(sirna)分子的开发。因此，本文提供了具有降低的脱靶效应的经修饰的sirna以及其用于使靶基因(例如，与疾病或病症相关的基因)沉默的用途。
2、在一些方面，本公开提供了一种经修饰的小干扰rna(sirna)分子，其包括有义链和反义链。所述反义链包括位置5和6处的核苷酸之间和/或位置6和7处的核苷酸之间的硫代磷酸酯(ps)核苷酸间连接。与在位置5和6处的核苷酸之间和在位置6和7处的核苷酸之间不具有ps核苷酸间连接的sirna对应物相比，所述经修饰的sirna具有降低的脱靶效应。在一些实施例中，所述经修饰的sirna分子可以与靶向部分缔合。
3、在一些实施例中，所述经修饰的sirna分子的所述反义链可以进一步包括位置1和2处的核苷酸之间和/或位置2和3处的核苷酸之间的ps核苷酸
4、在一些实施例中，所述经修饰的sirna分子的所述反义链的长度是19个至25个核苷酸。例如，所述经修饰的sirna分子的所述反义链的长度是21个核苷酸。在所述情况下，所述经修饰的sirna分子的所述反义链可以进一步包括位置19和20处的核苷酸之间和/或位置20和21处的核苷酸之间的ps核苷酸间连接。
5、在一些实施例中，所述经修饰的sirna分子使致病基因的表达沉默，所述致病基因任选地是细菌基因、病毒基因或真菌基因。在其它实施例中，所述经修饰的sirna分子使疾病基因的表达沉默。示例性疾病基因包含但不限于涉及癌症、纤维化、代谢性疾病、心血管疾病、免疫性疾病或遗传病症的基因。
6、在一些实例中，所述疾病基因可以涉及癌症。具体实例包含hif1a、hif2、igf1r、vegf、ereg、kras、alk、braf、nras、stat3、cdh2、kifl1、pik3ca、src、ras、raf和tp53。在一些实例中，所述疾病基因可以涉及纤维化。具体实例包含hif1a、hif1b、hif2、tgf-β1和ctgf。在一些实例中，所述疾病基因可以涉及代谢性疾病或心血管疾病。具体实例包含agt、apoc-iii和apob。在一些实例中，所述疾病基因可以涉及免疫性疾病。具体实例包含gata-3、ccr3、tgf-α1、il-6、tnf-α、ifn-β、il-1β、ccl2和ccl10。在其它实例中，所述疾病基因可以涉及遗传病症。具体实例包含apob和pcsk9。
7、在其它方面，本公开的特征在于一种药物组合物，其包括本文所公开的所述经修饰的sirna分子中的任何经修饰的sirna分子以及药学上可接受的载剂。
8、进一步，本文提供了一种用于使靶基因沉默的方法，所述方法包括使所述经修饰的sirna分子或包括所述经修饰的sirna分子和药学上可接受的载剂的所述药物组合物与表达所述靶基因的细胞接触。在一些实施例中，所述接触步骤可以是通过向有需要的受试者施用所述经修饰的sirna分子或所述药物组合物来进行的。
9、另一方面，本文提供了一种靶向人缺氧诱导因子1亚基α(hif1α)的干扰rna(抗hif1a干扰rna)。所述干扰rna包括与hif1αmrna中的靶位点互补的核苷酸序列。所述靶位点可以包括以下的核苷酸序列：
10、(a)aggccacauucacguauau(seq id no:1)；
11、(b)ugaggaaguaccauuauau(seq id no:2)；
12、(c)ccgguugaaucuucagaua(seq id no:3)；
13、(d)gcgcaaguccucaaagcac(seq id no:4)；
14、(e)aggccacauucacguaua(seq id no:5)；或者
15、(f)ugaggaaguaccauuaua(seq id no:6)。
16、在一些实施例中，所述hif1αmrna中的所述靶位点包括aggccacauucacguaua(seqid no:5)的核苷酸序列。在其它实施例中，所述hif1αmrna中的所述靶位点包括ugaggaaguaccauuaua(seq id no:6)的核苷酸序列。
17、在一些实施例中，所述抗hif1a干扰rna是包括有义链和反义链的sirna。在一些情况下，所述反义链的长度可以是19个至25个核苷酸。在实例中，所述有义链和所述反义链分别包括所述以下核苷酸序列：5'-aggccacauucacguauaa-3'(seq id no:7)和5'-uuauacgugaauguggccugu-3'(seq id no:8)。在其它实例中，所述有义链和所述反义链分别包括以下核苷酸序列：5'-ugaggaaguaccauuauaa-3'(seq id no:9)和5'-uuauaaugguacuuccuc aau-3'(seq id no:10)。
18、在一些实施例中，抗hif1a sirna的所述反义链可以包括位置5和6处的核苷酸之间和/或位置6和7处的核苷酸之间的硫代磷酸酯(ps)核苷酸间连接。与在位置5和6处的核苷酸之间和位置6和7处的核苷酸之间不具有ps核苷酸间连接的sirna对应物相比，此类经修饰的sirna具有降低的脱靶效应。在一些情况下，所述反义链进一步包括位置1和2处的核苷酸之间和/或位置2和3处的核苷酸之间的ps核苷酸间连接。可替代地或另外地，所述反义链进一步包括3'端处的第一核苷酸与第二核苷酸之间和/或3'端处的第二核苷酸与第三核苷酸之间的ps核苷酸间连接。
19、本文所公开的任何抗hif1a干扰rna可以进一步包括一个或多个经修饰的核苷酸。例如，所述抗hif1a干扰rna可以包括一个或多个经修饰的核苷酸，所述一个或多个经修饰的核苷酸包括2'-氟、2'-o-甲基或其组合。
20、另外，本公开的特征在于一种药物组合物，其包括如本文所公开的任何抗hif1a干扰rna以及药学上可接受的载剂。
21、又另一方面，本公开的特征在于一种用于抑制人hif1α表达的方法，所述方法包括本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种经修饰的小干扰RNA(siRNA)分子，其包括有义链和反义链，其中所述反义链包括位置5和6处的核苷酸之间和/或位置6和7处的核苷酸之间的硫代磷酸酯(PS)核苷酸间连接，并且其中与在位置5和6处的核苷酸之间以及在位置6和7处的核苷酸之间不具有PS核苷酸间连接的siRNA对应物相比，所述经修饰的siRNA具有降低的脱靶效应。
2.根据权利要求1所述的经修饰的siRNA分子，其中所述反义链进一步包括位置1和2处的核苷酸之间和/或位置2和3处的核苷酸之间的PS核苷酸间连接。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的经修饰的siRNA分子，其中所述反义链的长度是19个至25个核苷酸。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的经修饰的siRNA分子，其中所述反义链进一步包括3'端处的第一核苷酸与第二核苷酸之间和/或3'端处的第二核苷酸与第三核苷酸之间的PS核苷酸间连接。
5.根据权利要求3所述的经修饰的siRNA分子，其中所述反义链的长度是21个核苷酸。
6.根据权利要求5所述的经修饰的siRNA，其中所述反义链进一步包括位置19和
7.根据权利要求1至6中任一项所述的经修饰的siRNA分子，其中所述经修饰的siRNA分子使致病基因的表达沉默，所述致病基因任选地是细菌基因、病毒基因或真菌基因。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的经修饰的siRNA分子，其中所述经修饰的siRNA分子使疾病基因的表达沉默。
9.根据权利要求8所述的经修饰的siRNA分子，其中所述疾病基因涉及癌症、纤维化、代谢性疾病、心血管疾病、免疫性疾病或遗传病症。
10.根据权利要求9所述的经修饰的siRNA分子，其中所述疾病基因涉及癌症，任选地其中所述疾病基因选自由以下组成的组：HIF1A、HIF2、IGF1R、VEGF、EREG、KRAS、ALK、BRAF、NRAS、STAT3、CDH2、KIFL1、PIK3CA、Src、RAS、RAF和TP53。
11.根据权利要求9所述的经修饰的siRNA分子，其中所述疾病基因涉及纤维化，任选地其中所述疾病基因选自由以下组成的组：HIF1A、HIF1B、HIF2、TGF-β1和CTGF。
12.根据权利要求9所述的经修饰的siRNA分子，其中所述疾病基因涉及代谢性疾病或心血管疾病，任选地其中所述疾病基因选自由以下组成的组：AGT、ApoC-III和apoB。
13.根据权利要求9所述的经修饰的siRNA分子，其中所述疾病基因涉及免疫性疾病，任选地其中所述疾病基因选自由以下组成的组：GATA-3、CCR3、TGF-β1、IL-6、TNF-α、IFN-γ、IL-1β、CCL2和CCL10。
14.根据权利要求9所述的经修饰的siRNA分子，其中所述疾病基因涉及遗传病症，任选地其中所述疾病基因是apoB或PCSK9。
15.根据权利要求1至14中任一项所述的经修饰的siRNA分子，其中所述经修饰的siRNA分子与靶向部分缔合。
16.一种药物组合物，其包括根据权利要求1至15中任一项所述的经修饰的siRNA分子以及药学上可接受的载剂。
17.一种用于使靶基因沉默的方法，所述方法包括使根据权利要求1至15中任一项所述的经修饰的siRNA分子或根据权利要求16所述的所述药物组合物与表达所述靶基因的细胞接触。
18.根据权利要求17所述的方法，其中所述接触步骤是通过向有需要的受试者施用所述经修饰的siRNA分子或所述药物组合物来进行的。
19.一种靶向人缺氧诱导因子1亚基α(HIF1α)的干扰RNA，其中所述干扰RNA包括与HIF1αmRNA中的靶位点互补的核苷酸序列，并且其中所述HIF1αmRNA中的所述靶位点包括以下的核苷酸序列：
20.根据权利要求19所述的干扰RNA，其中所述干扰RNA是包括有义链和反义链的小干扰RNA(siRNA)。
21.根据权利要求19所述的干扰RNA，其中所述反义链的长度是19个至25个核苷酸。
22.根据权利要求20或权利要求21所述的干扰RNA，其中所述有义链和所述反义链分别包括以下核苷酸序列：
23.根据权利要求20至22中任一项所述的干扰RNA，其中所述反义链包括位置5和6处的核苷酸之间和/或位置6和7处的核苷酸之间的硫代磷酸酯(PS)核苷酸间连接，并且其中与在位置5和6处的核苷酸之间以及在位置6和7处的核苷酸之间不具有PS核苷酸间连接的siRNA对应物相比，经修饰...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种经修饰的小干扰rna(sirna)分子，其包括有义链和反义链，其中所述反义链包括位置5和6处的核苷酸之间和/或位置6和7处的核苷酸之间的硫代磷酸酯(ps)核苷酸间连接，并且其中与在位置5和6处的核苷酸之间以及在位置6和7处的核苷酸之间不具有ps核苷酸间连接的sirna对应物相比，所述经修饰的sirna具有降低的脱靶效应。
2.根据权利要求1所述的经修饰的sirna分子，其中所述反义链进一步包括位置1和2处的核苷酸之间和/或位置2和3处的核苷酸之间的ps核苷酸间连接。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的经修饰的sirna分子，其中所述反义链的长度是19个至25个核苷酸。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的经修饰的sirna分子，其中所述反义链进一步包括3'端处的第一核苷酸与第二核苷酸之间和/或3'端处的第二核苷酸与第三核苷酸之间的ps核苷酸间连接。
5.根据权利要求3所述的经修饰的sirna分子，其中所述反义链的长度是21个核苷酸。
6.根据权利要求5所述的经修饰的sirna，其中所述反义链进一步包括位置19和20处的核苷酸之间和/或位置20和21处的核苷酸之间的ps核苷酸间连接。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的经修饰的sirna分子，其中所述经修饰的sirna分子使致病基因的表达沉默，所述致病基因任选地是细菌基因、病毒基因或真菌基因。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的经修饰的sirna分子，其中所述经修饰的sirna分子使疾病基因的表达沉默。
9.根据权利要求8所述的经修饰的sirna分子，其中所述疾病基因涉及癌症、纤维化、代谢性疾病、心血管疾病、免疫性疾病或遗传病症。
10.根据权利要求9所述的经修饰的sirna分子，其中所述疾病基因涉及癌症，任选地其中所述疾病基因选自由以下组成的组：hif1a、hif2、igf1r、vegf、ereg、kras、alk、braf、nras、stat3、cdh2、kifl1、pik3ca、src、ras、raf和tp53。
11.根据权利要求9所述的经修饰的sirna分子，其中所述疾病基因涉及纤维化，任选地其中所述疾病基因选自由以下组成的组：hif1a、hif1b、hif2、tgf-β1和ctgf。
12.根据权利要求9所述的经修饰的sirna分子，其中所述疾病基因涉及代谢性疾病或心血管疾病，任选地其中所述疾病基因选自由以下组成的组：agt、apoc-iii和apob。
13.根据权利要求9所述的经修饰的sirna分子，其中所述疾病基因涉及免疫性疾病，任选地其中所述疾病基因选自由以下组成的组：gata-3、ccr3、tgf-β1、il-6、tnf-α、ifn-γ、il-1β、ccl2和ccl10。
14.根据权利要求9所述的经修饰的sirna分子，其中所述疾病基因涉及遗传病症，任选地其中所述疾病基因是apob或pcsk9。
15.根据权利要求1至14中任一项所述的经修饰的sirna...
【专利技术属性】
技术研发人员：张翼中，杨奇凡，陈怀懿，杨家俊，
申请(专利权)人：中天上海生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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