一种灵敏度高的萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术公开一种灵敏度高的萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒及其应用。本发明专利技术首先公开了一种灵敏度高的萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒，包括缓冲液与检测底物；其中，所述缓冲液包括三羟甲基氨基甲烷、甘油、表面活性剂、离子螯合剂、二价金属离子、三磷酸腺苷、还原剂、辅酶A、组氨酸和牛血清白蛋白；所述检测底物包括D‑荧光素。进一步公开了上述试剂盒的应用。本发明专利技术所述萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒在保证检测信号稳定性的前提下，提高发光信号值和信号窗口值，最终达到提高荧光素酶检测灵敏度的效果。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物检测技术。更具体地，涉及一种灵敏度高的萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒及其应用。

技术介绍

1、在科研与应用过程中，当待检测细胞或者生物学过程缺少可被直接检测的指示物，但待检测物的下游可以表达特异性的转录因子相关组件时，此时将转录因子对应调控的转录相关元件如启动子区dna和报告基因序列偶联一同转入待检测细胞，建立报告基因细胞系。通常报告基因会选择可以被准确检测的荧光蛋白质或酶，检测荧光蛋白表达量或通过检测酶参与的反应产物等作为指示物来反应待测细胞或生物学过程的活性，常用的报告基因有：氯霉素乙酰转移酶(cat)，β半乳糖苷酶(β-gal或lacz)，萤光素酶(luciferase)以及egfp等荧光蛋白。其中萤光素酶报告基因具有检测便捷、灵敏度高、线性范围宽、可以进行活细胞和活体检测等优点，使用非常广泛。

2、萤火虫荧光素酶(firefly luciferase)作为一种常见的报告基因所选取的酶，其可以催化底物荧光素(luciferin)进行氧化，在氧化过程中，荧光素底物发出波长在560nm附近的生物荧光，通过荧光测定仪精准测定本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒，其特征在于，包括缓冲液与检测底物；

2.根据权利要求1所述的萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒，其特征在于，所述还原剂为二硫苏糖醇；

3.根据权利要求1所述的萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒，其特征在于，所述三羟甲基氨基甲烷在缓冲液中的浓度为50-200mM，优选为150mM；

4.根据权利要求1所述的萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒，其特征在于，所述表面活性剂为吐温20和曲拉通100中任意一种，优选为吐温20，更优选的，在缓冲液中的浓度为1％-10％，最优选为5％。

5.根据权利要求1所述的萤火虫荧...

【技术特征摘要】

1.一种萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒，其特征在于，包括缓冲液与检测底物；

2.根据权利要求1所述的萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒，其特征在于，所述还原剂为二硫苏糖醇；

3.根据权利要求1所述的萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒，其特征在于，所述三羟甲基氨基甲烷在缓冲液中的浓度为50-200mm，优选为150mm；

4.根据权利要求1所述的萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒，其特征在于，所述表面活性剂为吐温20和曲拉通100中任意一种，优选为吐温20，更优选的，在缓冲液中的浓度为1％-10％，最优选为5％。

5.根据权利要求1所述的萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒，其特征在于，所述离子螯合剂为乙二胺四乙酸、1,2-环己二胺四乙酸、氨基三乙酸和乙二醇二乙醚二胺四乙酸中任意一种，优选为乙二醇二乙醚二胺四乙酸，在...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙艺洋，付丽娜，马静，辛文，
申请(专利权)人：北京全式金生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：