【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及到基因敲除及斑马鱼模型的构建，属于分子生物学领域，具体涉及一种hars基因缺失型斑马鱼及其构建方法和应用。
技术介绍
1、听力损失(hearing loss, hl)是人类最常见的感觉障碍之一。每年约有1/850的婴儿出生时就有明显的永久性听力损伤，听觉功能随着年龄的增长而进行性恶化。usher综合征是一种常染色体隐性遗传(ar)疾病，它表现为感音神经性耳聋(sensorineuralhearing loss, snhl)、前庭功能障碍以及由色素性视网膜炎(retinitis pigmentosa,rp)引起的视力丧失等。尽管usher综合征已被发现很久，但目前缺乏有效的预防和治疗方法。该病根据临床表现分为三种类型(usher i, ii, iii型)，usher iii型表现为进行性加重的感音神经性耳聋伴不同程度的前庭功能障碍，rp存在与否不确定，具体临床表现具有高度可变性。hars基因编码组氨酸-trna合成酶，是usher iiib型综合征(usher syndrome)的潜在致病基因，但是突变后导致的听力损失机理仍
【技术保护点】
1.一种hars基因缺失型斑马鱼的构建方法，其特征在于：包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于：所述步骤S2的PCR体系为：10×KODBuffer 5μL，dNTPs 5μL，Mg2+ 3μL，KOD酶 2μL，靶点特异引物/下游通用引物：1.25μL/1.25μL，模板2μL，RNase free H2O定容至50μL体系。
3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于：所述步骤S2的PCR扩增程序为：95℃3min；重复35个循环以下步骤：95℃ 15s，60℃ 20s，68℃ 1min；68℃ 7min；12℃保温
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【技术特征摘要】
1.一种hars基因缺失型斑马鱼的构建方法，其特征在于：包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于：所述步骤s2的pcr体系为：10×kodbuffer 5μl，dntps 5μl，mg2+ 3μl，kod酶 2μl，靶点特异引物/下游通用引物：1.25μl/1.25μl，模板2μl，rnase free h2o定容至50μl体系。
3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于：所述步骤s2的pcr扩增程序为：95℃3min；重复35个循环以下步骤：95℃ 15s，60℃ 20s，68℃ 1min；68℃ 7min；12℃保温。
4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于：所述步骤s3中使用megashortscripttm t7 high yield transcription kit试剂盒体外转录grna，反应体系如下：10×reaction buffer 1μl，atp 1μl，ctp 1μl，utp 1μl，gtp 1μl，模板 1μl，t7酶 1μl，rnase free h2o定容至10μl体系。
5.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于：所述步骤s3的转录条件为：37℃孵育2h；孵育完成后往所述反应体系中加入1μl dnase i，37℃孵育15min去除所述反应体系中剩余的模板。
6.根据...
【专利技术属性】
技术研发人员：吴星星，聂国辉，胡兵，彭婉君，廖佳好，
申请(专利权)人：深圳市第二人民医院深圳市转化医学研究院，
类型：发明
国别省市：
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