【技术实现步骤摘要】
本申请涉及无细胞反应，尤其涉及一种用于无细胞反应体系的添加剂、组合物及其应用。
技术介绍
1、无细胞体系能够为膜蛋白生产应用提供多种高效且不受蛋白活性毒性影响的合成体系。而除了高效表达以外，限制膜蛋白生产应用的另一个重要因素是其跨膜结构的有效支撑，这是膜蛋白保持活性的先决条件。没有得到有效支撑的膜蛋白疏水区域往往会形成聚集沉淀，从而影响其活性折叠甚至无法折叠成活性口袋。无细胞体系中由于其没有细胞膜的限制，在膜蛋白的跨膜支撑上有着其独特的优势。开放式无细胞反应可以很容易地补充各种添加剂来支持蛋白质合成、稳定为膜蛋白提供能够嵌入的疏水环境。
2、目前的无细胞体系例如大肠杆菌体系中缺失其中的生物膜结构，从而使得膜蛋白在无细胞体系表达后表现出一定的不可溶性，即疏水区域没有得到有效稳定造成的蛋白聚集情况。所以在无细胞体系中需要添加额外协助膜蛋白稳定疏水结构的成分。目前用的较多的是具有两亲性的表面活性剂，以及依靠合成脂质组成的生物膜模拟成分纳米圆盘以及脂质体。由不同膜模拟成分组成不同的膜结构可供不同膜蛋白对脂质组成、相、张力、流动性以及...
【技术保护点】
1.一种用于无细胞反应体系的添加剂，其中，所述添加剂为天然囊泡。
2.根据权利要求1所述的添加剂，其中，所述天然囊泡为细胞培养后破碎所得到的磷脂双分子层膜结构，优选为在破碎后通过离心所得到的磷脂双分子层膜结构，进一步优选通过差速离心或密度梯度离心所得到的磷脂双分子层膜结构；
3.根据权利要求1或2所述的添加剂，其中，所述细胞为原核细胞或真核细胞，优选地，所述原核细胞为大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、谷氨酸棒杆菌或需钠弧菌，优选为大肠杆菌；优选地，所述真核细胞为动物细胞、植物细胞或真菌细胞。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的添加剂，其中，...
【技术特征摘要】
1.一种用于无细胞反应体系的添加剂，其中，所述添加剂为天然囊泡。
2.根据权利要求1所述的添加剂，其中，所述天然囊泡为细胞培养后破碎所得到的磷脂双分子层膜结构，优选为在破碎后通过离心所得到的磷脂双分子层膜结构，进一步优选通过差速离心或密度梯度离心所得到的磷脂双分子层膜结构；
3.根据权利要求1或2所述的添加剂，其中，所述细胞为原核细胞或真核细胞，优选地，所述原核细胞为大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、谷氨酸棒杆菌或需钠弧菌，优选为大肠杆菌；优选地，所述真核细胞为动物细胞、植物细胞或真菌细胞。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的添加剂，其中，所述天然囊泡为敲除第一膜蛋白基因的细胞或敲除第一膜蛋白基因并添加协助跨膜蛋白嵌入的第二膜蛋白基因的细胞培养后破碎所得到的磷脂双分子层结构，优选为在破碎后通过离心所得到的磷脂双分子层膜结构，进一步优选通过差速离心或密度梯度离心所得到的磷脂双分子层膜结构；
5.根据权利要求4所述的添加剂，其中，第二膜蛋白为膜蛋白i插入酶或膜蛋白i易位酶，优选地，所述膜蛋白i插入酶为yidc；
6.一种无细胞反应体系组合物，其包含权利要求1-5中任一项所述的添加剂。
7.根据权利要求6所述的无细胞反应体系组合物，其中，所述无细胞反应体系组合物还包含dna模板和无细胞试剂。
8.根据权利要求6所述的无细胞反应体系组合物，还包括细...
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