培养红豆杉植物细胞生产紫杉醇的专用培养基制造技术

本发明专利技术公开了一种培养红豆杉植物细胞生产紫杉醇的专用培养基，以Ｂ５培养基为基础配方，通过正交优化试验得到用于培养红豆杉植物细胞生产紫杉醇的专用培养基。本发明专利技术的专用培养基与Ｂ５培养基进行基本成分对比生产时，专用培养基中紫杉醇的含量是Ｂ５培养基４．２倍；当接入高密度红豆杉植物细胞，在培养过程中添加硝酸银、水杨酸、壳聚糖、甲基茉莉酮酸、柠檬酸三铵、硫酸镧、苯丙氨酸、氨基乙酸、色氨酸和赖氨酸进行组合试验，能进一步提高紫杉醇的含量，缩短细胞生产周期，细胞培养到第３１天时，紫杉醇的含量最高为２８５．１５ｍｇ／Ｌ，是Ｂ５培养基中紫杉醇最高含量的８１倍，实现采用专用培养基培养红豆杉植物细胞来高效率生产紫杉醇。

Special culture medium for culturing Taxus plant cells to produce taxol

The present invention discloses a kind of special culture of taxol production of Taxus cell culture medium, on the basis of B5 medium formula, through orthogonal test for the special culture of taxol production of Taxus cell culture medium. The invention of the special culture medium and B5 culture medium components production contrast, content of special medium paclitaxel B5 medium was 4.2 times; when access to high density of Taxus cells, combination experiments of adding training in the process of silver nitrate, salicylic acid, chitosan, methyl jasmonic acid, three citric acid ketone ammonium sulfate, lanthanum, phenylalanine, glycine, tryptophan and lysine, can further improve the content of paclitaxel, shorten the production cycle of cells, cell culture to thirty-first days, the highest taxol content was 285.15mg / L, is 81 times the highest content of paclitaxel B5 culture medium, using the special culture medium of Taxus cells to taxol production efficiency.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物技术或生物制药领域，涉及一种培养红豆杉植物细胞生产紫杉醇的专用培养基。
技术介绍
目前常用于培养红豆杉植物细胞生产紫杉醇的培养基为B5培养基，但梅兴国等科 学家通过试验后发现，在B5培养基中培养红豆杉植物细胞时，容易出现变红变褐现象，造成 培养红豆杉植物细胞生产紫杉醇的含量较低，因此提出采用两步培养方法来培养红豆杉植 物细胞生产紫杉醇，首先在生长培养基中快速生长得到一定生物量的红豆杉植物细胞，然 后转入生产培养基中进行紫杉醇生产得到高含紫杉醇的细胞培养物，由于B5培养基成分复 杂，还没有设计或优化出一种培养红豆杉植物细胞促进紫杉醇合成的专用生产培养基，两 步培养生产紫杉醇的方法普遍选择B5培养基作为生产培养基，仍然没有解决培养红豆杉植 物细胞生产紫杉醇时含量较低的问题。
技术实现思路
本专利技术的目的就是提供一种既能显著提高培养红豆杉植物细胞生产的紫杉醇含 量，又能縮短红豆杉植物细胞生产周期的专用培养基。 本专利技术可以通过以下方式来实现培养红豆杉植物细胞生产紫杉醇的专用培养基 是每升水中含有2. 0 3. 5g KN03、75 300mg CaCl2 2H20、62. 5 250mg MgS04 7H20、 20 95mg NaH2P04 2H20、2. 5 10mg KI、10 270mg H3B03、10 50mg MnS04 H20、6 lOOmg ZnS04 7H20、0. 005 0. 05mg Na2Mo04 2H20、0. 1 10mg CuS04 5H20、0. 1 10mg CoCl2 6H20、50 200mg肌醇、0. 001 0. 5mg烟酸、0. 5 5mg维生素B6、0. 001 0. 5mg 维生素B1 20mg NAA、0. 2 lmg 6_BA、0. 2 lmg GA3、30 60g碳源、0. 84 3. 34mg 硝酸银、0. 1 10mg水杨酸、0. 1 10mg壳聚糖、11. 2 44. 9mg甲基茉莉酮酸、0. 6 2. 4g 拧檬酸三铵、50 585. 6mg谷氨酰胺、0. 1 10mg La2 (S04) 3 '9H20、 1 50mg苯丙氨酸、1 50mg氨基乙酸、1 50mg色氨酸和1 50mg赖氨酸。 本专利技术进一步的技术方案是专用培养基是每升水中含有2.75g KN03、150mg CaCl2 *2H20、125mg MgS04 *7H20、42. 5mg NaH2P04 *2H20、5mg Kl、90mg H3B03、30mg MnS04 *H20、 80mg ZnS04 7H20、0. Olmg Na2Mo04 2H20、lmg CuS04 5H20、lmg CoCl2 6H20、 lOOmg肌醇、0. 01mg烟酸、lmg维生素Be、0. 01mg维生素Bp8mg NAA、0. 5mg 6_BA、0. 5mg GA^45g碳源、1. 67mg硝酸银、lmg水杨酸、lmg壳聚糖、22. 4mg甲基茉莉酮酸、1. 2g柠檬酸三铵、292. 8mg 谷氨酰胺、2mg La2(S04)3 '9H20、10mg苯丙氨酸、10mg氨基乙酸、15mg色氨酸和10mg赖氨酸。 所述的碳源是蔗糖、葡萄糖、果糖、麦芽糖、乳糖、半乳糖中的一种或两种及其两种 以上的物质。 本专利技术的专用培养基与B5培养基进行基本成分对比生产时，在B5培养基中培养36 天后紫杉醇最高含量为3. 5mg/L，在专用培养基中培养36天后紫杉醇最高含量为14. 6mg/L，专用培养基中紫杉醇的含量是Bs培养基4. 2倍，效果显著，试验结果见表11 ;在专用培养 基中接入高密度红豆杉植物细胞，培养过程中添加硝酸银、水杨酸、壳聚糖、甲基茉莉酮酸、 柠檬酸三铵、硫酸镧、苯丙氨酸、氨基乙酸、色氨酸、和赖氨酸进行组合试验，可以进一步提 高紫杉醇的含量，并縮短细胞生产周期，细胞培养31天后紫杉醇含量最高为285. 15mg/L， 是B5培养基中紫杉醇含量的81倍，并且生产周期縮短了 5天，实现通过专用培养基来培养 红豆杉植物细胞高效率生产紫杉醇，试验结果见表12。具体实施例方式下面结合实施例，对本专利技术作进一步的说明，但其不代表为本专利技术的唯一实施方 式。 实施例一 培养红豆杉植物细胞生产紫杉醇的专用培养基是每升水中含有2. 0gKN03、75mg CaCl2 *2H20、62. 5mg MgS04 *7H20、20mg NaH2P04 *2H20、2. 5mgKI、10mg H3B03、10mg MnS04 *H20、 6mg ZnS04 7H20、0. 005mg Na2Mo04 2H20、0. lmg CuS04 5H20、0. lmg CoCl2 6H20、50mgJ3Jl 醇、0. 001mg烟酸、0. 5mg维生素B6、0. OOlmg维生素Bplmg NAA、0. 2mg 6_BA、0. 2mg GA3、30g 葡萄糖或果糖或者是麦芽糖、0. 84mg硝酸银、0. lmg水杨酸、0. lmg壳聚糖、11. 2mg甲基茉莉 酮酸、0. 6g柠檬酸三铵、50mg谷氨酰胺、0. lmgLa2 (S04) 3 *9H20、 lmg苯丙氨酸、lmg氨基乙酸、 lmg色氨酸和lmg赖氨酸。 实施例二 培养红豆杉植物细胞生产紫杉醇的专用培养基是每升水中含有3. 5gKN03、300mg CaCl2'2H20、250mg MgS04'7H20、95mg NaH2P04 *2H20、 lOmg Kl、270mg H3B03、50mg MnS04 *H20、 lOOmg ZnS04 7H20、0. 05mg Na2Mo04 2H20、10mg CuS04 5H20、10mg CoCl2 6H20、200mgJ3Jl 醇、0. 5mg烟酸、5mg维生素B6、0. 5mg维生素B20mg NAA、lmg 6-BA、lmg GA3、60g蔗糖或乳 糖或者是半乳糖、3. 34mg硝酸银、10mg水杨酸、10mg壳聚糖、44. 9mg甲基茉莉酮酸、2. 4g柠 檬酸三铵、585. 6mg谷氨酰胺、lOmg La2 (S04) 3 9H20、 50mg苯丙氨酸、50mg氨基乙酸、50mg色 氨酸和50mg赖氨酸。 实施例三 培养红豆杉植物细胞生产紫杉醇的专用培养基是每升水中含有2. 75gKN03、150mg CaCl2'2H20、125mg MgS04 *7H20、42. 5mg NaH2P04'2H20、5mgKI、90mg H萬、30mg MnS04 *H20、 80mg ZnS04 7H20、0. Olmg Na2Mo04 2H20、lmg CuS04 5H20、lmg CoCl2 6H20、 lOOmg肌醇、0. 01mg烟酸、lmg维生素Be、0. 01mg维生素Bp8mg NAA、0. 5mg 6_BA、0. 5mg GA^45g碳源、1. 67mg硝酸银、lmg水杨酸、lmg壳聚糖、22. 4mg甲基茉莉酮酸、1. 2g柠檬酸三铵、292. 8mg 谷氨酰胺、2mg La2(S0本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种培养红豆杉植物细胞生产紫杉醇的专用培养基，其特征在于专用培养基是每升水中含有２．０～３．５ｇ　　ＫＮＯ↓［３］、７５～３００ｍｇ　　ＣａＣｌ↓［２］.２Ｈ↓［２］Ｏ、６２．５～２５０ｍｇ　　ＭｇＳＯ↓［４］.７Ｈ↓［２］Ｏ、２０～９５ｍｇ　　ＮａＨ↓［２］ＰＯ↓［４］.２Ｈ↓［２］Ｏ、２．５～１０ｍｇ　　ＫＩ、１０～２７０ｍｇ　　Ｈ↓［３］ＢＯ↓［３］、１０～５０ｍｇ　　ＭｎＳＯ↓［４］.Ｈ↓［２］Ｏ、６～１００ｍｇ　　ＺｎＳＯ↓［４］.７Ｈ↓［２］、０．００５～０．０５ｍｇ　　Ｎａ２ＭｏＯ↓［４］.２Ｈ↓［２］Ｏ、０．１～１０ｍｇ　　ＣｕＳＯ↓［４］.５Ｈ↓［２］Ｏ、０．１～１０ｍｇ　　ＣｏＣｌ↓［２］.６Ｈ↓［２］Ｏ、５０～２００ｍｇ肌醇、０．００１～０．５ｍｇ烟酸、０．５～５ｍｇ维生素Ｂ↓［６］、０．００１～０．５ｍｇ维生素Ｂ↓［１］、１～２０ｍｇ　　ＮＡＡ、０．２～１ｍｇ　　６－ＢＡ、０．２～１ｍｇ　　ＧＡ↓［３］、３０～６０ｇ碳源、０．８４～３．３４ｍｇ硝酸银、０．１～１０ｍｇ水杨酸、０．１～１０ｍｇ壳聚糖、１１．２～４４．９ｍｇ甲基茉莉酮酸、０．６～２．４ｇ柠檬酸三铵、５０～５８５．６ｍｇ谷氨酰胺、０．１～１０ｍｇ　　Ｌａ↓［２］（ＳＯ↓［４］）↓［３］.９Ｈ↓［２］Ｏ、１～５０ｍｇ苯丙氨酸、１～５０ｍｇ氨基乙酸、１～５０ｍｇ色氨酸和１～５０ｍｇ赖氨酸。...

【技术特征摘要】
一种培养红豆杉植物细胞生产紫杉醇的专用培养基，其特征在于专用培养基是每升水中含有2.0～3.5g KNO3、75～300mg CaCl2·2H2O、62.5～250mg MgSO4·7H2O、20～95mg NaH2PO4·2H2O、2.5～10mg KI、10～270mg H3BO3、10～50mg MnSO4·H2O、6～100mg ZnSO4·7H2、0.005～0.05mg Na2MoO4·2H2O、0.1～10mg CuSO4·5H2O、0.1～10mg CoCl2·6H2O、50～200mg肌醇、0.001～0.5mg烟酸、0.5～5mg维生素B6、0.001～0.5mg维生素B1、1～20mg NAA、0.2～1mg 6-BA、0.2～1mg GA3、30～60g碳源、0.84～3.34mg硝酸银、0.1～10mg水杨酸、0.1～10mg壳聚糖、11.2～44.9mg甲基茉莉酮酸、0.6～2.4g柠檬酸三铵、50～585.6mg谷氨酰胺、0.1～10mg La2(SO4)3·9H2O、1～50mg苯丙氨酸、1～50mg氨基乙酸、1～50mg色氨酸和1～50mg赖氨酸。2. 根...

【专利技术属性】
技术研发人员：李干雄，张京维，侯云屏，骆雪兰，肖华，曹德，古志渊，黄巧明，
申请(专利权)人：梅州市杉维生物医药工程研究有限公司，
类型：发明
国别省市：44[中国|广东]