【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及蛋白质索烃，特别涉及单结构域荧光蛋白索烃以及融合蛋白索烃的设计、制备和应用。
技术介绍
1、受限于核糖体的翻译机制，大多数天然蛋白质分子链具有严格的线性结构。这些线性新生多肽链可以通过进一步折叠以及翻译后修饰的方法获得多样化的非线性拓扑结构(cascales,l.,et al.org.biomol.chem.2010,22,5053)。研究表明，这些非线性拓扑结构在多个层面提升了蛋白质的稳定性，对于拓展蛋白质的应用意义重大。近年来随着蛋白质拓扑工程的发展，可基因编码的化学工具箱也被逐步完善。利用天然缠结基元p53二聚体介导的被动模板法、谍反应介导的主动模板法以及异质二聚体介导的方法，研究人员构建了一系列多结构域拓扑蛋白(wang,x.w.and zhang,w.-b.,angew.chem.int.ed.2016,55,3442；wang,x.w.and zhang,w.-b.,angew.chem.int.ed.2017,56,13985；da,x.d.andzhang,w.-b.,angew.chem.int.ed.2...
【技术保护点】
1.一种单结构域荧光蛋白索烃的构建方法，包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤1)将荧光蛋白的第7个和第8个β折叠片之间的连接链断开，拆分为FP1和FP2两部分，其中，FP1包含β折叠片1-7而FP2包含β折叠片8-11，或者，FP1包含β折叠片8-11而FP2包含β折叠片1-7。
3.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤2)中所述两对正交的蛋白质偶联反应对包括两对正交的分离型内含肽，或者由一对分离型内含肽和一对其他可基因编码的蛋白质偶联反应对组成。
4.如权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述...
【技术特征摘要】
1.一种单结构域荧光蛋白索烃的构建方法，包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤1)将荧光蛋白的第7个和第8个β折叠片之间的连接链断开，拆分为fp1和fp2两部分，其中，fp1包含β折叠片1-7而fp2包含β折叠片8-11，或者，fp1包含β折叠片8-11而fp2包含β折叠片1-7。
3.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤2)中所述两对正交的蛋白质偶联反应对包括两对正交的分离型内含肽，或者由一对分离型内含肽和一对其他可基因编码的蛋白质偶联反应对组成。
4.如权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述分离型内含肽选自npudnae内含肽和vidal内含肽；所述其他可基因编码的蛋白质偶联反应对为体外实现蛋白质偶联的工具酶识别位点，所述工具酶选自转肽酶和谷氨酰胺转氨酶。
5.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤2)在基因卡带上设计his标签序列，在步骤4)中通过镍亲和层析进行蛋白纯化。
6.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述荧光蛋白为绿色荧光蛋白gfp、红色荧光蛋白mcherry、绿色荧光蛋白mwasabi或黄色荧光蛋白ypet，在步骤1)将荧光蛋白拆分为fp1和fp2两部分，其中fp1包含β折叠片1-7而fp2包含β折叠片8-11，或者，fp1包含β折叠片8-11而fp2包含β折叠片1-7；步骤2)构建基本结构为intc-fp1-intn-ggg-fp2-lpetg-h6的基因卡带，其中intc和intn分别代表分离型内含肽的c端部分和n端部分，ggg和lpetg是转肽酶识别位点，h6代表6×his标签，并在intn和ggg之间插入烟草叶斑病病毒蛋白酶的酶切位点；步骤3)基因卡带表达后在胞内完成第一个环的环化，同时在细胞中表达烟草叶斑病病毒蛋白酶对其识别位点进行特异性酶切，纯化后得到荧光蛋白轮烷前体；然后通过转肽酶体外关环得到单结构域荧光蛋白索烃。
7.一种融合蛋白索烃的制备方法，包括以下步骤：
8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，步骤1)将荧光蛋白的第7个和第8个β折叠片之间的连接链断开，拆分为fp1和fp2两部分，其中fp1包含β折叠片1-7而fp2包含β折叠片8-11，或者，fp1包含β折叠片8-11而fp2包含β折叠片1-7。
9.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，步骤2)中所述两对正交的蛋白质偶联反应对包括两对正交的分离型内含肽，或者由一对分离型内含肽和一对其他可基因编码的蛋白质偶联反应对组成。
10.如权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述分离型内含肽选自npudnae内含肽...
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