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一种穿梭载体及其应用制造技术

技术编号:41527355 阅读:44 留言:0更新日期:2024-06-03 23:02
本发明专利技术涉及分子生物学领域,具体涉及一种穿梭载体及其应用。本发明专利技术提供一种基于须糖多孢菌内源游离质粒复制子构建穿梭载体方法及其在提高丁烯基多杀菌素产量方面的应用。利用本发明专利技术提供的穿梭载体,可以在须糖多孢菌内源质粒存在的条件下使目标基因稳定表达,为后续须糖多孢菌的遗传改造奠定了基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物学领域,具体涉及一种穿梭载体及其应用


技术介绍

1、须糖多孢菌(saccharopolyspora pogona)具有重要的应用价值,其次级代谢产物丁烯基多杀菌素与多杀菌素具有相似的大环内酯结构,有很好的防治农林害虫、卫生害虫和线虫的效果,是当前国际上极具发展前景的环境友好型绿色生物农药。然而由于丁烯基多杀菌素极低的产量和较长的生产周期,难以实现工业化生产和应用,因此研究者尝试利用代谢工程等手段调控丁烯基多杀菌素的合成。

2、近年来,crispr、rece/t、cre/loxp等基因编辑技术广泛应用于放线菌的基因组编辑。须糖多孢菌是一种具有复杂的遗传背景和合成调控网络的非模式微生物,常规的遗传操作方法并不适用。究其原因,一是不适配的复制子元件导致外源质粒在胞内不能稳定存在;二是利用自杀型质粒通过双交换进行外源基因的敲入但是敲除概率极低,以上原因制约了对须糖多孢菌进行遗传改造的进程。

3、因此,亟需一种可在须糖多孢菌内稳定传代及表达的载体。


技术实现思路</p>

1、为了本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种复制子oriC-p58,其特征在于,所述复制子oriC-p58具有如SEQ ID NO.1所示的核酸序列,或者与SEQ ID NO.1所示核苷酸序列具有至少80%同一性的核酸序列。

2.权利要求1所述的复制子oriC-p58在构建载体中的用途,其特征在于,所述载体包括原核载体、穿梭载体。

3.一种穿梭载体,其特征在于,包括质粒骨架及权利要求1所述的复制子oriC-p58;

4.一种引物对,其特征在于,所述引物对用于扩增权利要求1所述的复制子oriC-p58,所述引物对具有如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列。

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【技术特征摘要】

1.一种复制子oric-p58,其特征在于,所述复制子oric-p58具有如seq id no.1所示的核酸序列,或者与seq id no.1所示核苷酸序列具有至少80%同一性的核酸序列。

2.权利要求1所述的复制子oric-p58在构建载体中的用途,其特征在于,所述载体包括原核载体、穿梭载体。

3.一种穿梭载体,其特征在于,包括质粒骨架及权利要求1所述的复制子oric-p58;

4.一种引物对,其特征在于,所述引物对用于扩增权利要求1所述的复制子oric-p58,所述引物对具有如seq id no.2和seq id no.3所示的核苷酸序列。

5.一种制备权利要求3所述穿梭载体的方法,其特征在于,包括:将...

【专利技术属性】
技术研发人员:李春李新颖王超郭超
申请(专利权)人:清华大学
类型:发明
国别省市:

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